Bolsa 14/07380-6 - Terapia genética, Hormônio do crescimento - BV FAPESP
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Otimização de parâmetros de transferência in vivo do gene do hormônio de crescimento visando a correção fenotípica de camundongos anões

Processo: 14/07380-6
Modalidade de apoio:Bolsas no Brasil - Mestrado
Data de Início da vigência: 01 de julho de 2014
Data de Término da vigência: 31 de janeiro de 2016
Área de conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
Acordo de Cooperação: Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
Pesquisador responsável:Cibele Nunes Peroni
Beneficiário:Eliana Rosa Lima Filha
Instituição Sede: Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares (IPEN). Secretaria de Desenvolvimento Econômico (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
Assunto(s):Terapia genética   Hormônio do crescimento   Camundongos   Plasmídeos
Palavra(s)-Chave do Pesquisador:camundongos anões | DNA plasmidial | Eletrotransferência in vivo | hormônio de crescimento | terapia genica | Terapia Gênica

Resumo

A eletrotransferência de DNA plasmidial contendo os genes do Hormônio de Crescimento Humano (hGH) ou de Camundongo (mGH) tem sido utilizada pelo nosso grupo. Para estes estudos de terapia gênica in vivo são usados dois modelos animais de deficiência de GH, os camundongos anões (lit/lit) e anões imunodeficientes (lit/scid). Com relação ao gene do hGH, foram obtidos níveis circulatórios sustentáveis do hormônio, durante 60 dias, e um aumento do peso corpóreo de 33% em camundongos lit/scid, após uma única administração do plasmídeo contendo esse gene, seguida de eletroporação, no músculo quadríceps. Foi também verificado que esta estratégia de terapia gênica proporcionou efeitos de crescimento comparáveis aos obtidos após injeções diárias de hGH recombinante. Quando realizado um ensaio de longa-duração (~6 meses), no qual os camundongos receberam 3 administrações do plasmídeo, foi obtido um aumento do peso corpóreo de ~50%, o qual correspondeu a uma aproximação de crescimento (catch-up growth) em relação ao camundongo de tamanho normal (scid) de 27%. Foi também utilizado um modelo homólogo de eletrotransferência, no qual um plasmídeo contendo o gene do mGH foi administrado em camundongos imunocompetentes lit/lit. Num ensaio de 3 meses, foi obtido um aumento do peso corpóreo desses animais de 34%, equivalente a um catch-up de 16%. A partir desses resultados, conclui-se que o tratamento foi eficiente, mas obviamente o ideal seria obter um catch-up da ordem de 100%, ou seja, que o camundongo anão apresentasse uma correção fenotípica completa, atingindo peso e tamanho do camundongo normal, além de níveis circulatórios similares do principal efetor do GH, o fator de crescimento semelhante à insulina I de camundongo (mIGF-I). No presente trabalho, o objetivo é portanto aumentar o catch-up e as principais ferramentas para isso seriam: 1) utilizar camundongos em sua fase mais expressiva de crescimento (~40 dias de idade); 2) aumentar o número de locais de injeção do plasmídeo no próprio músculo quadríceps ou em outro músculo, como o tibial anterior; 3) otimizar a quantidade da enzima hialuronidase utilizada para facilitar a penetração do plasmídeo nas fibras musculares; 4) empregar uma técnica atenuada de transferência gênica por injeção hidrodinâmica do plasmídeo, no sentido de diminuir a agressividade desta metodologia. Em cada condição estudada e realizada experimentalmente, deverá ser também determinado o possível incremento de mIGF-I em comparação com a situação anterior. (AU)

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Publicações científicas (6)
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
CECCHI, C. R.; HIGUTI, E.; LIMA, E. R.; VIEIRA, D. P.; SQUAIR, P. L.; PERONI, C. N.; BARTOLINI, P.. Efficient Non-Invasive Plasmid-DNA Administration into Tibialis Cranialis Muscle of ``Little{''} Mice. CURRENT MOLECULAR MEDICINE, v. 17, n. 3, p. 230-235, . (14/19757-7, 14/07380-6, 14/04277-0, 14/18242-3, 13/03747-0)
LIMA, ELIANA ROSA; CECCHI, CLAUDIA REGINA; HIGUTI, ELIZA; PACHECO DE JESUS, GUSTAVO PROTASIO; GOMES, ALISSANDRA MOURA; ZACARIAS, ENIO APARECIDO; BARTOLINI, PAOLO; PERONI, CIBELE NUNES. Optimization of Mouse Growth Hormone Plasmid DNA Electrotransfer into Tibialis Cranialis Muscle of ``Little{''} Mice. Molecules, v. 25, n. 21, . (14/19757-7, 14/07380-6, 17/15503-9)
HIGUTI, ELIZA; CECCHI, CLAUDIA R.; OLIVEIRA, NELIO A. J.; LIMA, ELIANA R.; VIEIRA, DANIEL P.; AAGAARD, LARS; JENSEN, THOMAS G.; JORGE, ALEXANDER A. L.; BARTOLINI, PAOLO; PERONI, CIBELE N.. Partial correction of the dwarf phenotype by non-viral transfer of the growth hormone gene in mice: Treatment age is critical. GROWTH HORMONE & IGF RESEARCH, v. 26, p. 1-7, . (14/04277-0, 14/18242-3, 13/03747-0, 11/21708-6, 14/19757-7, 14/07380-6)
CECCHI, CLAUDIA R.; ALSING, SIDSEL; JESUS, GUSTAVO P. P.; ZACARIAS, ENIO A.; KJAER, LISBETH; CLEMENT, MICHELLE S.; KUMAGAI-BRAESCH, MAKIKO; CORYDON, THOMAS J.; BARTOLINI, PAOLO; PERONI, CIBELE N.; et al. Sustained secretion of human growth hormone from TheraCyte devices encapsulated with PiggyBac-engineered retinal pigment epithelium cells. TISSUE & CELL, v. 82, p. 13-pg., . (13/03747-0, 14/19757-7, 14/07380-6, 14/04277-0, 14/18242-3)
LIMA, ELIANA ROSA; CECCHI, CLAUDIA REGINA; HIGUTI, ELIZA; PACHECO DE JESUS, GUSTAVO PROTASIO; GOMES, ALISSANDRA MOURA; ZACARIAS, ENIO APARECIDO; BARTOLINI, PAOLO; PERONI, CIBELE NUNES. Optimization of Mouse Growth Hormone Plasmid DNA Electrotransfer into Tibialis Cranialis Muscle of "Little" Mice. Molecules, v. 25, n. 21, p. 9-pg., . (14/19757-7, 14/07380-6, 17/15503-9)
CECCHI, C. R.; HIGUTI, E.; LIMA, E. R.; VIEIRA, D. P.; SQUAIR, P. L.; PERONI, C. N.; BARTOLINI, P.. Efficient Non-Invasive Plasmid-DNA Administration into Tibialis Cranialis Muscle of "Little" Mice. CURRENT MOLECULAR MEDICINE, v. 17, n. 3, p. 6-pg., . (13/03747-0, 14/19757-7, 14/07380-6, 14/04277-0, 14/18242-3)
Publicações acadêmicas
(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)
FILHA, Eliana Rosa Lima. Otimização de parâmetros de transferência in vivo do gene do hormônio de crescimento visando a correção fenotípica de camundongos anões. 2016. Dissertação de Mestrado - Universidade de São Paulo (USP). Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares (IPEN/BT) São Paulo.

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