Avaliação da capacidade de adesão e invasão de células Caco-2 por Salmonella Enteritidis proveniente de biofilmes tratados com óleo essencial de capim-limão (Cymbopogon citratus)

• Processo: 14/09364-8
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de julho de 2014
• Data de Término da vigência: 30 de junho de 2015
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Ciência e Tecnologia de Alimentos - Ciência de Alimentos
• Pesquisador responsável: Elaine Cristina Pereira de Martinis
• Beneficiário: Gabriela Satti Lameu
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto (FCFRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Assunto(s): Biofilmes Salmonella enteritidis Virulência Adesão celular Invasão celular Óleos essenciais Cymbopogon
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: adesão | biofilme | Caco-2 | Cymbopogon citratus | invasão | salmonella enteritidis | Microbiologia de alimentos

Resumo

O uso contínuo de alguns produtos sanitizantes em equipamentos e superfícies de processamento de alimentos pode levar à corrosão destas superfícies e há grande interesse no uso de produtos naturais para a sanitização de áreas para processamento de alimentos. Neste sentido, foi desenvolvido o projeto de Iniciação Científica Nº: 2013/01069-4 concedido por esta agência e executado por esta candidata entre 1º/03/2013 a 28/02/2014, em que se investigou o efeito de óleos essenciais das plantas Cymbopogon citratus, Zingiber officinale e Eucalyptus globulus em biofilmes de Salmonella Enteritidis em cupons de aço inoxidável. De acordo com os resultados daquele projeto, as preparações de óleos essenciais de Cymbopogon citratus, Zingiber officinale e Eucalyptus, na concentração de 4% (v/v) foram eficientes para a inibição de Salmonella Enteritidis. Foi demonstrado que Salmonella Enteritidis não foi recuperada em placas de ágar BHI após tratamento dos biofilmes, sendo definidas as concentrações bactericidas mínimas dos óleos essenciais (CBM). Entretanto, experimentos semelhantes realizados posteriormente com estudos de microscopia de fluorescência empregando corantes de viabilidade celular demonstraram a presença de células vivas de Salmonella Enteritidis mesmo após tratamento com os óleos essenciais, apesar da ausência de crescimento nas placas de ágar BHI. A técnica da avaliação da CBM por meio de semeadura em placas é recomendada na literatura para esses estudos, mas nossos resultados indicaram a necessidade de outras abordagens experimentais para avaliação da eficácia de óleos essenciais contra Salmonella sp. em biofilmes. Diante dos resultados da microscopia de fluorescência, os cupons com biofilmes de Salmonella Enteritidis tratados com os óleos essenciais em concentrações bactericidas foram lavados em solução salina fosfatada tamponada (PBS), transferidos para tubos de ensaio contendo caldo BHI, e incubados por 24 horas a 37ºC. Diversamente dos resultados negativos obtidos em placas, houve crescimento de Salmonella Enteritidis no caldo, indicando a viabilidade de algumas células remanescentes após o tratamento. Assim, o presente projeto deverá ser complementar ao projeto desenvolvido anteriormente, de modo que se pretende testar a patogenicidade da cultura Salmonella Enteritidis incubada após a imersão na soluções do óleo essencial de Cymbopgon citratus, por meio do teste de infecção de células epiteliais humanas da linhagem Caco-2. Para o teste de adesão e invasão, as células Caco-2 em crescimento serão transferidas para placas de 24 poços e incubadas por 24hs. Será observada a internalização bacteriana expressa como eficiência de invasão (EI). O número de bactérias interiorizadas será calculado em porcentagem, tendo como referência o inóculo inicial. Os resultados serão importantes para entender alguns fatores que afetam a sobrevivência de Salmonella sp. em biofilmes e avaliar o potencial patogênico das células tratadas com os óleos essenciais.