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Estabelecimento de uma metodologia baseada no sistema CRISPR/Cas9 para manipulação genética do fungo Moniliophthora perniciosa, causador da vassoura de bruxa do cacaueiro

Processo: 14/06181-0
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Mestrado
Vigência (Início): 01 de agosto de 2014
Vigência (Término): 29 de fevereiro de 2016
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Genética - Genética Molecular e de Microorganismos
Convênio/Acordo: Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
Pesquisador responsável:Gonçalo Amarante Guimarães Pereira
Beneficiário:Gabriel Lorencini Fiorin
Instituição-sede: Instituto de Biologia (IB). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
Assunto(s):Doenças de plantas   Vassoura-de-bruxa   Cacau   Theobroma cacao   Sistemas CRISPR-Cas   CRISPR-Cas9   Fungos   Moniliophthora   Técnicas de inativação de genes

Resumo

O cacaueiro (Theobroma cacao) é uma cultura perene de notável importância econômica mundial, sendo responsável pela geração de uma porção considerável das divisas nacionais. A produtividade da lavoura cacaueira no Brasil foi elevada e forneceu grandes benefícios ao país até o final dos anos 80, quando a doença vassoura de bruxa, causada pelo basidiomiceto Moniliophthora perniciosa, foi introduzida nas plantações de cacau da principal região produtora do Brasil, o sul da Bahia. Como consequência, a agroindústria cacaueira local foi destruída, levando o Brasil da condição de exportador para a de importador de cacau e causando drásticos problemas de ordem social e ambiental na região. Uma vez que estratégias tradicionais de controle se mostram pouco efetivas para a doença, a melhor compreensão desta patologia torna-se essencial para o desenvolvimento de programas mais apropriados de combate. Importante progresso neste sentido vem sendo obtido com a análise do genoma de M. perniciosa e do atlas transcriptômico da vassoura de bruxa, que têm contribuído para a identificação e caracterização de múltiplos fatores relacionados à patogenicidade do fungo. Entretanto, estudos funcionais têm sido fortemente limitados pela ausência de uma metodologia para a manipulação genética de M. perniciosa, sendo este o principal gargalo atual no estudo da vassoura de bruxa. Tendo isto em vista, o presente projeto visa o estabelecimento de um procedimento para geração de linhagens knockout do fungo utilizando o sistema CRISPR-Cas9. Para isto, um cassete de inativação dirigido ao gene Mp-aox (codificador da enzima oxidase alternativa) será elaborado e utilizado na transformação de M. perniciosa. Tal gene do fungo já foi bem caracterizado por nosso grupo e recursos para avaliação fenotípica in vitro estão bem estabelecidos, sendo possível a validação das linhagens knockout de maneira simples e robusta. Uma vez estabelecido, o procedimento de manipulação genética em M. perniciosa poderá ser utilizado para produção de linhagens deficientes em inúmeros outros genes de interesse, constituindo-se em uma poderosa ferramenta para o estudo dos fatores envolvidos na patogenicidade de M. perniciosa. (AU)

Publicações científicas
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
FIORIN, GABRIEL LORENCINI; SANCHEZ-VALLET, ANDREA; DE TOLEDO THOMAZELLA, DANIELA PAULA; VITAL DO PRADO, PAULA FAVORETTI; DO NASCIMENTO, LEANDRO COSTA; DE OLIVEIRA FIGUEIRA, ANTONIO VARGAS; THOMMA, BART P. H. J.; GUIMARAES PEREIRA, GONCALO AMARANTE; PEREIRA LIMA TEIXEIRA, PAULO JOSE. Suppression of Plant Immunity by Fungal Chitinase-like Effectors. Current Biology, v. 28, n. 18, p. 3023+, SEP 24 2018. Citações Web of Science: 3.
Publicações acadêmicas
(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)

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