Caracterização bioquímica e avaliação in vitro da ativação de fibroblastos e do potencial leishmanicida de uma L-aminoácido oxidase (LAAO) da peçonha de Crotalus durissus terrificus

• Processo: 14/06170-8
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de outubro de 2014
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2016
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Farmácia - Análise Toxicológica
• Acordo de Cooperação: Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
• Pesquisador responsável: Eliane Candiani Arantes Braga
• Beneficiário: Gisele Adriano Wiezel
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto (FCFRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 11/23236-4 - Toxinas animais nativas e recombinantes: análise funcional, estrutural e molecular, AP.TEM
• Bolsa(s) vinculada(s): 14/23285-3 - Caracterização de modificações pós-traducionais de uma L-aminoácido oxidase isolada da peçonha da serpente Crotalus durissus terrificus, BE.EP.MS
• Assunto(s): L-aminoácido oxidase Fibroblastos Venenos de origem animal Leishmaniose Crotalus durissus
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Crotalus durissus terrificus | L-aminoácido oxidase | Leishmaniose | Peçonhas de Serpentes | Toxinas Animais

Resumo

Os acidentes ofídicos representam um sério problema de saúde pública nos países tropicais. No Brasil, a grande maioria dos acidentes notificados é causada pela família Viperidae, sendo o gênero Crotalus responsável pela maior letalidade entre os acidentes. As peçonhas de serpentes são misturas complexas de proteínas, peptídeos e compostos orgânicos e minerais que afetam uma enorme variedade de processos biológicos. A L-aminoácido oxidase (LAAO) é uma enzima presente nessas peçonhas que catalisa a oxidação de L-aminoácidos, produzindo ±-cetoácidos, amônia e peróxido de hidrogênio. Várias atividades funcionais de LAAOs foram relatadas e têm demonstrado um atrativo para a área da biotecnologia. Entre essas, podem ser citadas atividades antitumoral, antimicrobiana, atividade na coagulação sanguínea, anti-HIV, indutora de edema e também a modulação da atividade de células do sistema imune. É muito relatada também a ação de L-aminoácido oxidases contra parasitas do gênero Leishmania, incluindo L. braziliensis, L. amazonensis, L. donovani, entre outros. A Leishmaniose é considerada um problema de saúde pública e, atualmente, vem ganhando grande interesse, principalmente devido à expansão de viagens internacionais e ao crescimento da população. Na América do Sul é uma doença tropical endêmica e possui poucas abordagens terapêuticas. Assim, tendo em vista a ação das LAAOs sobre Leishmania spp, a importância da Leishmaniose para a saúde pública, e o potencial biotecnológico destas enzimas, pretende-se pioneiramente isolar e caracterizar uma LAAO presente na peçonha de C. d. terrificus, visando ampliar o conhecimento sobre o mecanismo de ação desta enzima, a sua relevância na resposta imunológica observada no envenenamento e, principalmente, sua possível aplicação como agente e/ou adjuvante terapêutico para o tratamento da leishmaniose. Para isso, o isolamento da LAAO será realizado através de cromatografia líquida rápida de proteínas e sua caracterização será feita a partir do sequenciamento de seus peptídeos internos, determinação da massa molar através de espectrometria de massas, avaliação da especificidade frente a diferentes substratos, determinação de parâmetros cinéticos (Km, Vmáx, Kcat) e avaliação in vitro da ativação induzida em fibroblastos pela análise da citotoxicidade e da dosagem de citocinas, óxido nítrico e mediadores lipídicos. Será também avaliada a sua atividade leishmanicida. (AU)

Publicações científicas

(4)

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

BORDON, KARLA C. F.; WIEZEL, GISELE A.; AMORIM, FERNANDA G.; ARANTES, ELIANE C.. Arthropod venom Hyaluronidases: biochemical properties and potential applications in medicine and biotechnology. Journal of Venomous Animals and Toxins including Tropical Diseases, v. 21, OCT 22 2015. (11/12317-3, 14/06170-8, 11/23236-4)

BORDON, KARLA C. F.; WIEZEL, GISELE A.; CABRAL, HAMILTON; ARANTES, ELIANE C.. Bordonein-L, a new L-amino acid oxidase from Crotalus durissus terrificus snake venom: isolation, preliminary characterization and enzyme stability. Journal of Venomous Animals and Toxins including Tropical Diseases, v. 21, AUG 13 2015. (14/06170-8, 11/23236-4)

WIEZEL, GISELE A.; RUSTIGUEL, JOANE K.; MORGENSTERN, DAVID; ZOCCAL, KARINA E.; FACCIOLI, LUCIA H.; CRISTINA NONATO, M.; UEBERHEIDE, BEATRIX; ARANTES, ELIANE C.. Insights into the structure, function and stability of bordonein-L, the first L-amino acid oxidase from Crotalus durissus terrificus snake venom. Biochimie, v. 163, p. 33-49, AUG 2019. (14/03332-7, 11/23236-4, 15/24010-0, 14/23285-3, 14/06170-8, 14/07125-6)

BOLDRINI-FRANCA, JOHARA; COLOGNA, CAMILA TAKENO; PUCCA, MANUELA BERTO; FIGUEIREDO BORDON, KARLA DE CASTRO; AMORIM, FERNANDO GOBBI; PINO ANJOLETTE, FERNANDO ANTONIO; CORDEIRO, FRANCIELLE ALMEIDA; WIEZEL, GISELE ADRIANO; CERNI, FELIPE AUGUSTO; PINHEIRO-JUNIOR, ERNESTO LOPES; et al. Minor snake venom proteins: Structure, function and potential applications. BIOCHIMICA ET BIOPHYSICA ACTA-GENERAL SUBJECTS, v. 1861, n. 4, p. 824-838, APR 2017. (14/06170-8, 11/12317-3, 11/23236-4, 15/16714-8, 12/13590-8, 13/26619-7, 14/15644-3, 12/12954-6, 13/26200-6)

Publicações acadêmicas

(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)

WIEZEL, Gisele Adriano. Caracterização bioquímica e avaliação in vitro da ativação de fibroblastos e do potencial leishmanicida de uma L-aminoácido oxidase (LAAO) da peçonha de Crotalus durissus terrificus. 2016. Dissertação de Mestrado - Universidade de São Paulo (USP). Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto (PCARP/BC) Ribeirão Preto.