Novas perspectivas funcionais de uma serinoprotease de Crotalus durissus colliline...
- Auxílios pontuais (curta duração)
| Processo: | 14/16182-3 |
| Linha de fomento: | Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado |
| Vigência (Início): | 01 de outubro de 2014 |
| Vigência (Término): | 31 de março de 2018 |
| Área do conhecimento: | Ciências da Saúde - Farmácia - Análise Toxicológica |
| Pesquisador responsável: | Eliane Candiani Arantes Braga |
| Beneficiário: | Johara Boldrini França |
| Instituição-sede: | Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto (FCFRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil |
| Vinculado ao auxílio: | 11/23236-4 - Toxinas animais nativas e recombinantes: análise funcional, estrutural e molecular, AP.TEM |
| Bolsa(s) vinculada(s): | 15/16714-8 - Novas perspectivas funcionais de uma serinoprotease de Crotalus durissus collilineatus: atividade sobre canais iônicos dependentes de voltagem, BE.EP.PD |
| Assunto(s): | Canais iônicos Toxicologia |
Resumo A complexidade e variedade de alvos fisiológicos com as quais as toxinas de peçonha de serpentes interagem fazem destas, importantes candidatas para modelos no desenvolvimento de novos fármacos e ferramentas biológicas. As peçonhas de serpentes da família Viperidae são ricas fontes de enzimas proteolíticas que exercem diversas atividades biológicas na presa ou vítima, como ativação do sistema complemento e inflamação, alterações na diferenciação celular, interações com o sistema hemostático, entre outros. As serinoproteases de peçonha de serpentes (SVSPs - Snake Venom Serine Protease) atuam principalmente sobre proteínas plasmáticas, gerando uma diversidade de alterações fisiológicas com efeitos sobre a agregação plaquetária, coagulação sanguínea, fibrinólise, pressão sanguínea, sistema complemento e sistema nervoso. No entanto, a complexidade dos mecanismos pelos quais as SVSPs afetam a homeostasia da vítima não foi, até o momento, completamente esclarecida. Diante disso, o presente projeto tem por objetivo buscar novas perspectivas sobre a funcionalidade de uma SVSP de Crotalus durissus collilineatus, denominada collineina-1, com o intuito de ampliar os possíveis campos de aplicação dessa classe de toxinas. Dentro desse contexto, neste projeto é a proposta a investigação da ação da collineina-1, nas formas nativa, recombinante e mutante, sobre diferentes canais iônicos dependentes de voltagem. A collineina-1 nativa será purificada da peçonha por um método cromatográfico previamente descrito e a enzima recombinante será expressa em Pichia pastoris nas formas cataliticamente ativa e inativa (apresentando uma mutação na His43 da tríade catalítica por uma Arg43), de acordo com protocolo previamente padronizado. As toxinas serão testadas quanto a sua ação sobre diferentes canais iônicos dependentes de voltagem (Kv e Nav) expressos em oócitos de Xenopus laevis por ensaios de eletrofisiologia. Os mecanismos pelos quais a collineina-1 atua sobre os canais iônicos dependente de voltagem serão então investigados por ensaios de eletrofisiologia utilizando a toxina cataliticamente inativa e por testes de reversibilidade do bloqueio ou modulação do canal. Os canais iônicos desempenham importantes funções celulares como excitação de nervos e células musculares, regulação da pressão sanguínea, mobilidade e capacitação de espermatozoides e modulação da proliferação de células tumorais. Apesar da importância desses canais, são poucas as toxinas de serpentes estudadas quanto à ação sobre canais iônicos, o que reforça a importância do estudo proposto na busca de novas toxinas moduladoras ou bloqueadoras desses canais com potencial para serem aplicadas em diversas áreas da ciência e/ou saúde. | |