Caracterização do vasa e sua região promotora em jundiá (Rhamdia quelen) para produzir uma linhagem de peixe transgênico expressando a proteína fluorescente verde sob controle do promotor do vasa

• Processo: 14/18325-6
• Modalidade de apoio: Bolsas no Exterior - Estágio de Pesquisa - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2015
• Data de Término da vigência: 19 de junho de 2015
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Recursos Pesqueiros e Engenharia de Pesca - Recursos Pesqueiros de Águas Interiores
• Pesquisador responsável: Rafael Henrique Nóbrega
• Beneficiário: Lucas Benites Doretto
• Supervisor: Jan Bogerd
• Instituição Sede: Instituto de Biociências (IBB). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Botucatu. Botucatu , SP, Brasil
• Instituição Anfitriã: Utrecht University (UU), Holanda
• Vinculado à bolsa: 13/03384-4 - Identificação de genes de pluripotência em testículos de Zebrafish, Danio rerio: uma abordagem para identificar possíveis marcadores de espermatogônias tronco, BP.IC
• Assunto(s): Marcador molecular Células germinativas Células-tronco espermatogoniais Peixe-zebra
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: characterization vasa | Fish | Molecular marker | vasa promoter sequencing | vasa sequencing | Biologia da Reprodução

Resumo

As células germinativas primordiais (CGP) são a s progenitoras das células da linhagem germinativa em todos os animais existentes. Em peixe, a diferenciação das CGPs é dependente de fatores herdados maternalmente, os quais são concentrados numa região do embrião denominada "plasma germinativo". No plasma germinativo, vasa é um dos fatores maternos cruciais responsável por induzir a diferenciação nas CGPs. Vasa também é importante para o desenvolvimento de células germinativas sendo altamente expresso em espermatogônias jovens, incluindo as células tronco espermatogoniais (CTE). A aplicação de técnicas de transgenia tem sido grandemente utilizada para gerar linhagens de peixes transgênicos que expressam a proteína fluorescente verde (egfp) sob controle do promotor do vasa. Tais linhagens transgênicas podem ser úteis para várias aplicações em biotecnologia e no campo da aquicultura. Por exemplo, peixes vasa::egfp podem ser úteis para selecionar as CTE e a células germinativas primordiais para transplante, criopreservação e estudos para conservação. Sendo assim, o objetivo desse projeto é clonar e sequenciar o gene vasa e seu promotor de uma importante espécie nativa brasileira, Jundiá (Rhamdia quelen), e posteriormente gerar construções os quais possuem egfp sob controle do promotor do vasa. Utilizando o sistema Tol2 de transposição, injeções dessas construções primeiro em embrião de zebrafish (Danio rerio) e posteriormente em embrião de Jundiá, será gerada a primeira espécie nativa transgênica para a linhagem germinativa. Além disso, este conhecimento, aprendido com o Dr. Bogerd permitirá a construção de outras linhagens transgênicas, por exemplo, para outros marcadores de CTEs. (AU)