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Caracterização funcional de linhagem superexpressora de RPA-1 de Leishmania amazonensis(LaRPA-1)

Processo: 14/19622-4
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
Vigência (Início): 01 de novembro de 2014
Vigência (Término): 31 de outubro de 2015
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Genética - Genética Molecular e de Microorganismos
Pesquisador responsável:Maria Isabel Nogueira Cano
Beneficiário:Gabriel Arantes Galvão Dias dos Santos
Instituição-sede: Instituto de Biociências (IBB). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Botucatu. Botucatu , SP, Brasil
Assunto(s):Leishmania mexicana   Telômero

Resumo

A leishmaniose é uma doença negligenciada que atinge milhões de pessoas no mundo inteiro, inclusive no Brasil. Tal zoonose é causada pelo protozoário Leishmania spp e é de difícil tratamento e controle, haja vista a restrição do tratamento farmacológico, além da resistência dos parasitos e vetores. Conhecer melhor a biologia celular e molecular do microrganismo causador dessa enfermidade é essencial para buscar novas alternativas de tratamento para a doença, visando sua erradicação. Uma possível estratégia é a elucidação de mecanismos envolvidos no metabolismo do DNA e da estrutura telomérica, como por exemplo, o estudo da proteína RPA, sabidamente envolvida nessas duas vias. Em Leishmania, a RPA-1 não aparece interagindo com os telômeros na forma de um trímerocomo na maioria dos eucariotos, o que sugere que a LaRPA-1, proteína alvo deste projeto, tenha características especiais, que estão associadas a viabilidade celular, como auxiliar a regulação da maquinaria de reparo ao DNA, recrutar a telomerase e auxiliar na manutenção dos telômeros. Esse estudo tem como objetivo caracterizar uma linhagem superexpressora de LaRPA-1, através de sua clonagem por diluição seriada e de estudos funcionais in vitro tais como de localização subcelular utilizando imunofluorescência indireta, western blot, southern blot telomérico e elaboração de curvas de crescimentos. Todos estes ensaios serão realizados em paralelo com a linhagem selvagem e com a linhagem transfectada com o vetor de expressão vazio, no intuito de elucidar algumas funções da proteína.

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