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Caracterização da expressão do gene GJA1 por meio da curva dose resposta em células neoplásicas pulmonares transfectadas com vetores gênicos induzíveis por doxiciclina: estudos in vitro

Processo: 14/11376-4
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
Vigência (Início): 01 de dezembro de 2014
Vigência (Término): 31 de julho de 2015
Área do conhecimento:Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Patologia Animal
Pesquisador responsável:Lucas Martins Chaible
Beneficiário:Ana Paula Dias
Instituição-sede: Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia (FMVZ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
Assunto(s):Terapia genética   Conexinas   Neoplasias   Expressão gênica

Resumo

As neoplasias pulmonares são uma das grandes causas de morte na sociedade moderna, responsável por mais de 10 milhões de mortes por ano no mundo, sendo a incidência dessa doença esta diretamente relacionada com os hábitos do dia-a-dia, entre ele o hábito de fumar.A linhagem celular E9 corresponde à células epiteliais tumorais provenientes do pulmão murino. Essas células apresentam naturalmente a diminuição da expressão do gene Gja1, responsável pela proteína de comunicação intercelular Cx43. Essa redução na comunicação intercelular vem sido correlacionada com a maior malignidade de tumores devido clones tumorais não serem suprimidos pelo microambiente que os cercam. A proposta desse trabalho é ser uma etapa complementar de outro projeto de terapia gênica utilizando o gene Gja1. Nesse trabalho maior, visamos observar se o aumento da expressão do gene Cx43 causa a restauração da comunicação intercelular e por consequência a alteração nas características de malignidade de células neoplásicas. Nesse projeto de Iniciação científica visamos padronizar a curva dose resposta entre doxiciclina e o referente nível de expressão do gene Gja1, que está presente no vetor de expressão condicional pelo fármaco. Para isso, utilizaremos células tumorais pulmonares E9, onde por meio da transfecção do sistema de expressão gênica induzível pela droga doxiciclina (TetON-Cx43) estimularemos a expressão da proteína heteróloga. Esse sistema de expressão já esta construído e testado, onde verificamos que na presença desse antibiótico o sistema é ativado e o gene Gja1 é expresso, sua expressão é desativada com a retirada da droga. Esse projeto tem o objetivo justamente de relacionar as doses de doxiciclina (100ng/mL, 500ng/mL e 1000ng/mL) com os níveis de expressão do gene Gja1 quantificados por meio da técnica de Real Time PCR.