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Investigação do mecanismo de regulação da metaloproteinase ADAM17 pela interação com Trx-1

Processo: 14/06485-9
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
Vigência (Início): 01 de fevereiro de 2015
Vigência (Término): 05 de agosto de 2018
Área do conhecimento:Ciências da Saúde - Medicina
Convênio/Acordo: Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
Pesquisador responsável:Adriana Franco Paes Leme
Beneficiário:Rute Alves Pereira e Costa
Instituição-sede: Centro Nacional de Pesquisa em Energia e Materiais (CNPEM). Ministério da Ciência, Tecnologia, Inovações e Comunicações (Brasil). Campinas , SP, Brasil
Vinculado ao auxílio:10/19278-0 - Estudo da regulação de ADAMs em câncer oral, AP.JP
Bolsa(s) vinculada(s):16/01528-7 - O efeito da super-expressão de Trx-1 na expressão proteica e no estado redox de cisteínas pela marcação com iodoTMT e TMT, BE.EP.PD
Assunto(s):Proteômica   Transdução de sinais

Resumo

ADAM17 é uma metaloproteinase de membrana que tem a principal função de modular eventos de sinalização de superfície celular pela liberação de ectodomínios de proteínas de superfície, tornando-os solúveis para interagir com receptores celulares. Vários estudos mostram a modulação da atividade de ADAM17 e recentemente nosso grupo identificou a Trx-1 como parceiro de interação e sugeriu que a super-expressão de Trx-1 pode ser uma das vias de regulação de ADAM17. Entretanto, esse mecanismo de regulação ainda não foi elucidado. Não se sabe se essa regulação pode ser (1) via interação direta da Trx-1 com ADAM17; (2) via conversão de espécies reativas de oxigênio (EROs) pela Trx-1, uma vez que tem-se proposto que as EROs atuam na ativação de ADAM17, ou ainda (3) por sinalização indireta da Trx sobre outros alvos ou ligantes. Dessa forma, o objetivo desse projeto será investigar esses três possíveis mecanismos e para isso, (1) realizaremos mutações na Trx-1, como também experimentos com peptídeos sintéticos, com sequências obtidas a partir da interface de interação baseando-se no modelo publicado (Aragão et al., 2012) para avaliar o efeito na interação e atividade de ADAM17; (2) quantificaremos EROs pela medida dos níveis de O2.- e H2O2 em condições de super-expressão de Trx-1 com sítio catalítico de C32 e C35 mutados ou não, para avaliar disponibilidade de EROs e, com isso, a regulação da atividade de ADAM17. Para responder a terceira hipótese, será realizada a imunoprecipitação de Trx-1 com sítio catalítico de C32 e C35 mutados ou não, análise da identidade e quantificação relativa dos parceiros de interação por proteômica quantitativa, utilizando-se nesse caso SILAC, bem como seus níveis de fosforilação. Em acréscimo, será avaliado o estado de oxido-redução das proteínas eluídas da ligação com Trx-1 utilizando-se a marcação das cisteínas com ICAT. Os parceiros de interação identificados serão analisados quanto à sua função e possibilidade em interferir na atividade de ADAM17. Espera-se que esse trabalho possa contribuir para elucidação do mecanismo de regulação de ADAM17 via Trx-1. (AU)

Publicações científicas
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
GRANATO, DANIELA C.; P. E COSTA, RUTE A.; KAWAHARA, REBECA; YOKOO, SAMI; ARAGAO, ANNELIZE Z.; DOMINGUES, ROMENIA R.; PAULETTI, BIANCA A.; HONORATO, RODRIGO V.; FATTORI, JULIANA; FIGUEIRA, ANA CAROLINA M.; OLIVEIRA, PAULO S. L.; CONSONNI, SILVIO R.; FERNANDES, DENISE; LAURINDO, FRANCISCO; HANSEN, HINRICH P.; LEME, ADRIANA F. PAES. Thioredoxin-1 Negatively Modulates ADAM17 Activity Through Direct Binding and Indirect Reductive Activity. Antioxidants & Redox Signaling, v. 29, n. 8 FEB 2018. Citações Web of Science: 0.
RIVERA, CESAR; OLIVEIRA, ANA KARINA; PEREIRA COSTA, RUTE ALVES; DE ROSSI, TATIANE; PAES LEME, ADRIANA FRANCO. Prognostic biomarkers in oral squamous cell carcinoma: A systematic review. Oral Oncology, v. 72, p. 38-47, SEP 2017. Citações Web of Science: 18.

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