Análise funcional do complexo RPA em Trypanosoma cruzi e seu envolvimento com DNA telomérico

• Processo: 14/02978-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Vigência (Início): 01 de abril de 2015
• Vigência (Término): 31 de março de 2019
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Molecular e de Microorganismos
• Acordo de Cooperação: Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
• Pesquisador responsável: Maria Carolina Quartim Barbosa Elias Sabbaga
• Beneficiário: Raphael Souza Pavani
• Instituição Sede: Instituto Butantan. Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 13/07467-1 - CeTICS - Centro de Toxinas, Imuno-Resposta e Sinalização Celular, AP.CEPID
• Bolsa(s) vinculada(s): 16/24255-6 - Definindo modificações pós-traducionais e interatores da proteína Replication Protein A (RPA) de tripanossomatídeos frente ao dano no DNA., BE.EP.DR
• Assunto(s): Doença de Chagas Trypanosoma cruzi Telômero
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Doença de Chagas | replicação | Rpa-1 | Rpa-2 | telômeros | Trypanosoma cruzi | Biologia molecular de tripanossomatídeos

Resumo

A doença de Chagas é causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi, afligindo diversas regiões do mundo, com foco principal na América Latina. Apesar dos avanços, aproximadamente oito milhões de pessoas estão infectadas com essa enfermidade. O estudo da biologia molecular desse parasita poderá facilitar o descobrimento de novas terapias, bem como auxiliar na compreensão da evolução molecular dos organismos eucariontes. O complexo telomérico, responsável pela integridade e estabilidade genômica, é formado pela interação de DNA com proteínas, que são responsáveis pela manutenção e proteção desses terminais. O complexo RPA de eucariotos compreende um heterotrímero, que cumpre diversas funções vitais para a célula, sendo uma peça fundamental na replicação, reparo, recombinação e inclusive manutenção telomérica. Em mamíferos e leveduras, o complexo RPA está envolvido principalmente com a replicação e reparo nos telômeros. Estudos realizados pelo nosso grupo mostraram que a proteína RPA-1 de T. cruzi interage com os telômeros in vivo, em formas replicativas e não replicativas e mostraram que, diferentemente de outros organismos, esta proteína possui afinidade pela fita rica em G telomérica. Além disso, a análise estrutural da proteína RPA-1 de tripanossomatídeos evidencia diferenças significativas em relação à RPA-1 de eucariotos superiores, como a ausência do domínio 70N que interage com proteínas da maquinaria de reparo. Em Leishmania amazonenis, apenas a subunidade RPA-1 foi encontrada interagindo com os telômeros. A ausência de homólogos de proteínas que interagem com o overhang telomérico em tripanosomas, a interação específica RPA-1-telômero e as peculiaridades estruturais da RPA, levam-nos a hipotetizar que essa proteína cumpre um papel distinto daquele descrito para eucariotos, podendo estar envolvida com a proteção dos telômeros. Este projeto visa compreender a função da RPA-1 nos telômeros através de experimentos de RNAi para silenciamento de RPA-1 e através de ensaio de complementação em leveduras. Visa também iniciar estudos com a proteína RPA-2 para checar a ocorrência de trimerização do complexo RPA no telomero, bem como procurar novas proteínas interatoras deste complexo por ensaios de imunoprecipitação, seguidos de análise por espectrometria de massas. (AU)

Publicações científicas

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(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

DA SILVA, MARCELO SANTOS; SEGATTO, MARCELA; PAVANI, RAPHAEL SOUZA; GUTIERREZ-RODRIGUES, FERNANDA; BISPO, VANDERSON DA SILVA; GENNARI DE MEDEIROS, MARISA HELENA; CALADO, RODRIGO TOCANTINS; ELIAS, MARIA CAROLINA; NOGUEIRA CANO, MARIA ISABEL. Consequences of acute oxidative stress in Leishmania amazonensis: From telomere shortening to the selection of the fittest parasites. BIOCHIMICA ET BIOPHYSICA ACTA-MOLECULAR CELL RESEARCH, v. 1864, n. 1, p. 138-150, JAN 2017. (13/07467-1, 12/50263-5, 14/02978-0, 14/24170-5, 15/10580-0, 13/07937-8)

PAVANI, RAPHAEL SOUZA; DA SILVA, MARCELO SANTOS; HENRIQUE FERNANDES, CARLOS ALEXANDRE; MORINI, FLAVIA SOUZA; ARAUJO, CHRISTIANE BEZERRA; DE MATTOS FONTES, MARCOS ROBERTO; SANT'ANNA, OSVALDO AUGUSTO; MACHADO, CARLOS RENATO; CANO, MARIA ISABEL; FRAGOSO, STENIO PERDIGAO; et al. Replication Protein A Presents Canonical Functions and Is Also Involved in the Differentiation Capacity of Trypanosoma cruzi. PLoS Neglected Tropical Diseases, v. 10, n. 12, DEC 2016. (14/13375-5, 14/24170-5, 13/17864-8, 14/02978-0, 13/07467-1, 15/10580-0)

PAVANI, RAPHAEL SOUZA; VITARELLI, MARCELA O.; FERNANDES, CARLOS A. H.; MATTIOLI, FABIO F.; MORONE, MARIANA; MENEZES, MILENE C.; FONTES, MARCOS R. M.; CANO, MARIA ISABEL N.; ELIAS, MARIA CAROLINA. Replication Protein A-1 Has a Preference for the Telomeric G-rich Sequence in Trypanosoma cruzi. Journal of Eukaryotic Microbiology, v. 65, n. 3, p. 345-356, MAY-JUN 2018. (13/07467-1, 15/10580-0, 14/02978-0)

PAVANI, RAPHAEL S.; DE LIMA, LOYZE P.; LIMA, ANDRE A.; FERNANDES, CARLOS A. H.; FRAGOSO, STENIO P.; CALDERANO, SIMONE G.; ELIAS, MARIA CAROLINA. Nuclear export of replication protein A in the nonreplicative infective forms of Trypanosoma cruzi. FEBS Letters, v. 594, n. 10, p. 1596-1607, MAY 2020. (16/50050-2, 14/02978-0, 18/14432-3, 18/21785-0, 13/07467-1)

MARIN, PAULA ANDREA; OBONAGA, RICARDO; PAVANI, RAPHAEL SOUZA; DA SILVA, MARCELO SANTOS; DE ARAUJO, CHRISTIANE BEZERRA; LIMA, ANDRE ARRUDA; AVILA, CARLA CRISTI; CESTARI, IGOR; MACHADO, CARLOS RENATO; ELIAS, MARIA CAROLINA. ATR Kinase Is a Crucial Player Mediating the DNA Damage Response in Trypanosoma brucei. FRONTIERS IN CELL AND DEVELOPMENTAL BIOLOGY, v. 8, DEC 22 2020. (17/18719-2, 18/12364-0, 15/10580-0, 14/02978-0, 14/24170-5, 19/01895-8, 16/50050-2, 14/13375-5)

Publicações acadêmicas

(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)

PAVANI, Raphael Souza. Análise funcional do complexo Replication Protein A em tripanossomatídeos e seu envolvimento com DNA telomérico.. 2019. Tese de Doutorado - Universidade de São Paulo (USP). Instituto de Ciências Biomédicas (ICB/SDI) São Paulo.