Resumo
A luz ultravioleta (UV) é um agente altamente carcinogênico ao qual os seres vivos estão expostos, e, quando é absorvida pelo DNA, pode ocasionar, na maioria das vezes, lesões conhecidas como dímeros de pirimidina, destacando-se dois tipos principais: dímeros com anel ciclobutano (CPD, do inglês, cyclobutane pyrimidine dimers) ou pirimidina 6-4 pirimidona (6-4PP). Essas lesões distorcem a dupla hélice e bloqueiam fisicamente a replicação e a transcrição, podendo resultar em instabilidade genômica ou morte celular. O mecanismo de reparo por excisão de nucleotídeos (NER) é responsável pela remoção dessas lesões do DNA, porém quando essas lesões permanecem até o momento da replicação, há um processo conhecido como síntese translesão (TLS), que é um mecanismo de tolerância ao dano realizado por DNA polimerases (Pol) específicas. Há dois modelos propostos que tentam descrever o mecanismo de TLS, diretamente na forquilha de replicação e por gap-filling, e, em ambos, existe a formação de lacunas, ou regiões de DNA simples fita (DNAsf). Nesse contexto, o objetivo do presente projeto é determinar a contribuição de cada tipo de dímero (CPD e 6-4PP) na formação de DNAsf após irradiação com doses baixas de luz UV. Para isso empregaremos células humanas deficientes em NER e silenciadas para as Pol de TLS Pol ·, Pol ¶ e Rev1, utilizando uma metodologia inédita que permita detectar a presença de DNAsf de forma sensível. O uso de vetores adenovirais para a expressão de fotoliases específicas permitirá investigar a contribuição de cada tipo de lesão na formação dessas regiões de DNAsf.
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