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Clonagem e expressão da proteína CDK8 (quinase humana dependente de ciclina)

Processo: 15/04161-4
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
Vigência (Início): 01 de maio de 2015
Vigência (Término): 30 de abril de 2016
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
Pesquisador responsável:Fernanda Canduri
Beneficiário:Danielle Karoline Silva Do Vale Castro
Instituição-sede: Instituto de Química de São Carlos (IQSC). Universidade de São Paulo (USP). São Carlos , SP, Brasil
Assunto(s):Expressão heteróloga   Proteínas quinases   Atividade enzimática   Fosforilação   Ciclo celular   RNA polimerase II   Cromatografia líquida de alta eficiência

Resumo

As proteínas quinases dependentes de ciclina humana (CDKs) compreendem uma família de proteínas serina/treonina quinase cuja atividade é dependente da associação de duas subunidades. Uma subunidade capaz de regular positivamente (ciclina) ou negativamente (inibidores de CDK) e uma subunidade catalítica, a proteína quinase, regulada através de reações sítio específicas de fosforilação e desfosforilação que ocorrem no resíduo de treonina. Os estudos destas proteínas têm se tornado importante devido à intensa participação na regulação de eventos essenciais para o desenvolvimento celular como o ciclo celular e a transcrição. Assim, a regulação do ciclo celular é importante para ambos os processos, uma vez que a atividade da RNA polimerase II é modulado durante o ciclo celular onde ocorrem variações no estado de fosforilação do domínio carboxi-terminal (CTD) de sua subunidade maior, e está intimamente envolvida no desenvolvimento de doenças relacionadas à divisão celular, como o câncer. As CDKs regulam esses eventos celulares através de reações de fosforilação e desfosforilação, sendo que os mecanismos que permitem que a proteína atue são os estados de fosforilação da subunidade quinase, degradação controlada da subunidade ciclina, síntese gradual de CDK e ciclina e ação de proteínas inibidoras de CDKs. As CDKs 7-9 são importantes reguladores transcricionais, sendo a CDK8 a mais complexa, uma vez que tem sido associada a efeitos positivos e negativos sobre a transcrição. O estudo destas proteínas contribui para o entendimento da relação estrutura-função destas e sua relação com oncogenes e supressores de tumor. O presente projeto de pesquisa tem como objetivo clonar o cDNA da CDK8, expressá-la em sistema bacteriano e purificá-la por cromatografia de alta eficiência. Após sua obtenção, serão realizados ensaios para determinação de sua estrutura secundária, bem como ensaios de atividade enzimática na presença de inibidores.

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