Determinação do proteoma de Rickettsia rickettsii, agente etiológico da Febre Maculosa Brasileira

• Processo: 14/05855-7
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de junho de 2015
• Data de Término da vigência: 31 de maio de 2018
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Parasitologia - Entomologia e Malacologia de Parasitos e Vetores
• Acordo de Cooperação: Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
• Pesquisador responsável: Andréa Cristina Fogaça
• Beneficiário: Larissa Almeida Martins
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 13/26450-2 - Caracterização molecular das interações entre carrapatos, riquétsias e hospedeiros vertebrados, AP.TEM
• Assunto(s): Proteoma Virulência Carrapatos Rickettsia rickettsii Interações hospedeiro-patógeno
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: carrapato | Cultivos celulares | febre maculosa | Proteoma | Rickettsia | Transcriptoma | Identificação e Caracterização de Proteínas

Resumo

A Febre Maculosa das Montanhas Rochosas, conhecida no Brasil como Febre Maculosa Brasileira (FMB), é a mais grave riquetsiose que acomete o homem. A FMB é causada pela bactéria Rickettsia rickettsii, uma alpha-proteobactéria intracelular obrigatória transmitida ao homem pela picada de diferentes espécies de carrapatos. As taxas de letalidade da doença são altas, podendo ultrapassar os 40% no Brasil. Apesar da severidade e das altas taxas de letalidade, ainda hoje a profilaxia baseia-se exclusivamente na prática de se evitar o contato com os carrapatos vetores. Além de apresentar patogenicidade para o hospedeiro vertebrado, R. rickettsii também exerce um efeito deletério sobre seus vetores, uma vez que menores taxas reprodutivas e de sobrevivência são observadas em carrapatos infectados. Também já foi descrito que essa bactéria encontra-se em um estado avirulento no carrapato vetor, necessitando da exposição a temperaturas próximas a do hospedeiro vertebrado ou aos fatores da alimentação sanguínea para reativar seu fenótipo virulento. Para esclarecer os mecanismos moleculares envolvidos na reativação da virulência de R. rickettsii, nosso grupo de pesquisa determinou os efeitos da elevação da temperatura e da alimentação sanguínea sobre o perfil transcricional de R. rickettsii infectando intestino ou glândulas salivares de carrapatos. A alimentação sanguínea modulou expressão de fatores de virulência de R. rickettsii principalmente no intestino, incluindo componentes do Sistema de Secreção do Tipo IV (T4SS), enquanto a elevação da temperatura ocasionou maiores alterações na expressão gênica nas glândulas salivares. Como o intestino é um órgão importante para a aquisição da bactéria pelo vetor e as glândulas salivares pela transmissão para o hospedeiro vertebrado, os resultados sugerem que proteínas diferentes estejam envolvidas na colonização do vetor e do hospedeiro vertebrado. Dessa maneira, os objetivos desse projeto de pesquisa são: (I) identificar o conjunto de proteínas de R. rickettsii produzidas durante a infecção de células de carrapatos (linhagem AAE2) e de células endoteliais humanas (HMVECnd) por cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massas in tandem (LC-MS/MS); (II) analisar in silico as proteínas identificadas por LC-MS/MS para a predição das potencialmente secretadas para a célula hospedeira; (III) determinar a cinética de transcrição de cerca de 10 proteínas diferencialmente expressas em células AAE2 e HMVECnd e em tecidos do carrapato vetor por RT-qPCR. Também avaliar a presença dos transcritos em biópsias de pele do hospedeiro vertebrado; (IV) determinar a localização de três proteínas secretadas por R. rickettsii na célula hospedeira; (V) e avaliar os efeitos destas três proteínas sobre a viabilidade das células hospedeiras. Os dados gerados poderão auxiliar a elucidação dos mecanismos de virulência dessa bactéria para seus vetores e hospedeiros, bem como poderão revelar possíveis alvos para o desenvolvimento de vacinas. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

MARTINS, LARISSA ALMEIDA; PALMISANO, GIUSEPPE; CORTEZ, MAURO; KAWAHARA, REBECA; DE FREITAS BALANCO, JOSE MARIO; FUJITA, ANDRE; ALONSO, BEATRIZ IGLESIAS; BARROS-BATTESTI, DARCI MORAES; BRAZ, GLORIA REGINA CARDOSO; TIRLONI, LUCAS; et al. The intracellular bacterium Rickettsia rickettsii exerts an inhibitory effect on the apoptosis of tick cells. PARASITES & VECTORS, v. 13, n. 1, DEC 1 2020. (12/24105-3, 18/15549-1, 18/18257-1, 14/11513-1, 07/57749-2, 14/06863-3, 14/05855-7, 13/26450-2)

Publicações acadêmicas

(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)

MARTINS, Larissa Almeida. Determinação do proteoma diferencial de células de carrapato em resposta à infecção por Rickettsia rickettsii, agente etiológico da febre maculosa. 2018. Tese de Doutorado - Universidade de São Paulo (USP). Instituto de Ciências Biomédicas (ICB/SDI) São Paulo.