Ativação da via PI3K na expressão de FBLN1 e CLDN6 pela triiodotironina e estradiol em linhagens de adenocarcinoma mamário

• Processo: 14/23786-2
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de junho de 2015
• Data de Término da vigência: 30 de novembro de 2016
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Sandro José Conde
• Beneficiário: Gabriela Silva de Souza
• Instituição Sede: Instituto Federal de Educação, Ciência e Tecnologia de São Paulo (IFSP). Campus São Roque. São Roque , SP, Brasil
• Assunto(s): Biotecnologia Linhagem celular tumoral Hormônios tireóideos Tri-iodotironina Estradiol Adenocarcinoma Transcrição reversa Reação em cadeia por polimerase (PCR)
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Adenocarcinoma mamário | Ativação da via PI3K | FBLN1 e CLDN6 | Biotecnologia

Resumo

Recentemente o nosso grupo demonstrou que os genes FBLN1 e CLDN6 foram estimulados por E2 e T3 nas células MCF-7. Dessa forma, nossa hipótese é que o hormônio tireoidiano altera a expressão dos genes FBLN1 e CLDN6 sem a necessidade de translocação ao núcleo, ou seja, através da via de ativação de phosphatidylinositol-3-kinase (PI3K). Para tanto, pretende-se elucidar melhor a via de ação doE2 e T3 na ativação gênica desses alvos em linhagens celulares de adenocarcinoma de mama. Será utilizado o inibidor LY294002 (50µM), que bloqueia a via PI3K e nos mostra se essa ação é dependente dessa via. Metodologia: Linhagens celulares de câncer de mama MCF-7 serão plaqueadas em intervalos de tempo de 10 minutos, 30 minutos, 1 hora e 4 horas com E2 (10-7M), T3 (10-8M), E2 (10-7M) + LY294002 (50µM), T3 (10-8M) + LYLY294002 (50µM) eLY294002 (50µM). Todos os tratamentos empregados serão realizados em triplicata. Será realizada extração de RNA total para a obtenção do cDNA - Transcrição reversa (RT) do RNA e PCR tempo real para expressão dos genes em cada tratamento.