| Processo: | 14/24170-5 |
| Linha de fomento: | Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado |
| Vigência (Início): | 01 de junho de 2015 |
| Vigência (Término): | 31 de maio de 2019 |
| Área do conhecimento: | Ciências Biológicas - Genética - Genética Molecular e de Microorganismos |
| Convênio/Acordo: | Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) |
| Pesquisador responsável: | Maria Carolina Quartim Barbosa Elias Sabbaga |
| Beneficiário: | Marcelo Santos da Silva |
| Instituição-sede: | Instituto Butantan. Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil |
| Vinculado ao auxílio: | 13/07467-1 - CeTICS - Centro de Toxinas, Imuno-Resposta e Sinalização Celular, AP.CEPID |
| Bolsa(s) vinculada(s): | 17/18719-2 - Análise estrutural do complexo de reconhecimento de origens de replicação (ORC) em Trypanosoma brucei utilizando cryo-electron microscopy e single-particle analysis, BE.EP.PD |
| Assunto(s): | Replicação do DNA Trypanosoma cruzi |
Resumo Trypanosoma cruzi é um protozoário flagelado, pertencente à família Trypanosomatidae, e agente etiológico da doença de Chagas, uma doença neglicenciada que afeta milhões de pessoas em todo o mundo. Para sobreviver, este parasito necessita replicar adequadamente seu DNA e isso envolve a ação coordenada de um complexo de variadas proteínas. A replicação do DNA inicia-se com o licenciamento de uma maquinaria de pré-replicação (pré-RC) em regiões específicas do DNA denominadas origens de replicação. A dinâmica e as proteínas envolvidas na maquinaria pré-RC ainda não estão bem definidas nos tripanosomatídeos. Deste modo, pretendemos identificar e caracterizar possíveis interatores da proteína TcOrc1/Cdc6, a qual é responsável pelo reconhecimento e ativação de origens de replicação em T. cruzi. Para tal, pretendemos realizar ensaios de captura (imunoprecipitação e co-imunoprecipitação), identificar os possíveis interatores em SDS-PAGE e espectrômetro de massas, e confirmar suas funções na replicação através de knockout em T. cruzi. Em paralelo, pretendemos realizar ensaios de pull down utilizando TcOrc1/Cdc6 recombinante marcada com diferentes tags (6xHis e Maltose Binding Protein - MBP) para verificar se esta proteína oligomeriza. Em caso positivo, esta oligomerização será confirmada in vitro por ultracentrifugação analítica e in vivo utilizando parasitas transfectados com TcOrc1/Cdc6 contendo diferentes caudas. Além disso, pretendemos também avaliar o quanto os processos de metabolismo de DNA (transcrição e reparo) influenciam a taxa de replicação em T. cruzi. Para isto iremos inibir a transcrição (utilizando ±-manitina) e causar danos no DNA (utilizando radiação U.V. e tratamento com H2O2) e verificar, através da técnica denominada SMARD (Single Molecule Analisys of Replicated DNA), se a taxa de replicação das forquilhas é alterada. Vale ressaltar que este conhecimento poderá auxiliar futuras estratégias antiparasitárias, já que a replicação do DNA está diretamente relacionada à manutenção cromossômica e viabilidade celular. (AU) | |
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