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Dinâmica da replicação do DNA em Trypanosoma cruzi: caracterização do licenciamento e da taxa de replicação

Processo: 14/24170-5
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
Vigência (Início): 01 de junho de 2015
Vigência (Término): 31 de maio de 2019
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Genética - Genética Molecular e de Microorganismos
Convênio/Acordo: Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
Pesquisador responsável:Maria Carolina Quartim Barbosa Elias Sabbaga
Beneficiário:Marcelo Santos da Silva
Instituição-sede: Instituto Butantan. Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
Vinculado ao auxílio:13/07467-1 - CeTICS - Centro de Toxinas, Imuno-Resposta e Sinalização Celular, AP.CEPID
Bolsa(s) vinculada(s):17/18719-2 - Análise estrutural do complexo de reconhecimento de origens de replicação (ORC) em Trypanosoma brucei utilizando cryo-electron microscopy e single-particle analysis, BE.EP.PD
Assunto(s):Replicação do DNA   Trypanosoma cruzi

Resumo

Trypanosoma cruzi é um protozoário flagelado, pertencente à família Trypanosomatidae, e agente etiológico da doença de Chagas, uma doença neglicenciada que afeta milhões de pessoas em todo o mundo. Para sobreviver, este parasito necessita replicar adequadamente seu DNA e isso envolve a ação coordenada de um complexo de variadas proteínas. A replicação do DNA inicia-se com o licenciamento de uma maquinaria de pré-replicação (pré-RC) em regiões específicas do DNA denominadas origens de replicação. A dinâmica e as proteínas envolvidas na maquinaria pré-RC ainda não estão bem definidas nos tripanosomatídeos. Deste modo, pretendemos identificar e caracterizar possíveis interatores da proteína TcOrc1/Cdc6, a qual é responsável pelo reconhecimento e ativação de origens de replicação em T. cruzi. Para tal, pretendemos realizar ensaios de captura (imunoprecipitação e co-imunoprecipitação), identificar os possíveis interatores em SDS-PAGE e espectrômetro de massas, e confirmar suas funções na replicação através de knockout em T. cruzi. Em paralelo, pretendemos realizar ensaios de pull down utilizando TcOrc1/Cdc6 recombinante marcada com diferentes tags (6xHis e Maltose Binding Protein - MBP) para verificar se esta proteína oligomeriza. Em caso positivo, esta oligomerização será confirmada in vitro por ultracentrifugação analítica e in vivo utilizando parasitas transfectados com TcOrc1/Cdc6 contendo diferentes caudas. Além disso, pretendemos também avaliar o quanto os processos de metabolismo de DNA (transcrição e reparo) influenciam a taxa de replicação em T. cruzi. Para isto iremos inibir a transcrição (utilizando ±-manitina) e causar danos no DNA (utilizando radiação U.V. e tratamento com H2O2) e verificar, através da técnica denominada SMARD (Single Molecule Analisys of Replicated DNA), se a taxa de replicação das forquilhas é alterada. Vale ressaltar que este conhecimento poderá auxiliar futuras estratégias antiparasitárias, já que a replicação do DNA está diretamente relacionada à manutenção cromossômica e viabilidade celular. (AU)

Publicações científicas (13)
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
FERNANDES, CARLOS A. H.; PEREZ, ARINA M.; BARROS, ANDREA C.; DREYER, THIAGO R.; DA SILVA, MARCELO S.; MOREA, EDNA GICELA O.; FONTES, MARCOS R. M.; CANO, MARIA ISABEL N. Dual cellular localization of the Leishmania amazonensis Rbp38 (LaRbp38) explains its affinity for telomeric and mitochondrial DNA. Biochimie, v. 162, p. 15-25, JUL 2019. Citações Web of Science: 0.
COSTA, MONICA SOARES; GONCALVES, YASMIM GARCIA; TEIXEIRA, SAMUEL COTA; DE OLIVEIRA NUNES, DEBORA CRISTINA; LOPES, DAIANA SILVA; DA SILVA, CLAUDIO VIEIRA; DA SILVA, MARCELO SANTOS; BORGES, BRUNA CRISTINA; BARBOSA SILVA, MARCELO JOSE; RODRIGUES, RENATA SANTOS; RODRIGUES, VERIDIANA DE MELO; VON POELHSITZ, GUSTAVO; GERALDO YONEYAMA, KELLY APARECIDA. Increased ROS generation causes apoptosis-like death: Mechanistic insights into the anti-Leishmania activity of a potent ruthenium(II) complex. Journal of Inorganic Biochemistry, v. 195, p. 1-12, JUN 2019. Citações Web of Science: 0.
DE LIMA, LOYZE P.; CALDERANO, SIMONE G.; DA SILVA, MARCELO S.; DE ARAUJO, CHRISTIANE B.; VASCONCELOS, ELTON J. R.; IWAI, LEO K.; PEREIRA, CLAUDIO A.; FRAGOSO, STENIO P.; CAROLINA ELIAS, M. Ortholog of the polymerase theta helicase domain modulates DNA replication in Trypanosoma cruzi. SCIENTIFIC REPORTS, v. 9, FEB 27 2019. Citações Web of Science: 0.
EMILIO TAVERNELLI, LUIS; MOTTA, MARIA CRISTINA M.; SILVA GONCALVES, CAMILA; DA SILVA, MARCELO SANTOS; ELIAS, MARIA CAROLINA; LUCIA ALONSO, VICTORIA; SERRA, ESTEBAN; CRIBB, PAMELA. Overexpression of Trypanosoma cruzi High Mobility Group B protein (TcHMGB) alters the nuclear structure, impairs cytokinesis and reduces the parasite infectivity. SCIENTIFIC REPORTS, v. 9, JAN 17 2019. Citações Web of Science: 0.
DA SILVA, MARCELO S.; MARINI, PAULA A.; REPOLES, BRUNO M.; ELIAS, MARIA C.; MACHADO, CARLOS R. Analysis of DNA Exchange Using Thymidine Analogs (ADExTA) in Trypanosoma cruzi. BIO-PROTOCOL, v. 8, n. 24 DEC 20 2018. Citações Web of Science: 0.
DA SILVA, MARCELO SANTOS; HOVEL-MINER, GALADRIEL A.; BRIGGS, EMMA M.; ELIAS, MARIA CAROLINA; MCCULLOCH, RICHARD. Evaluation of mechanisms that may generate DNA lesions triggering antigenic variation in African trypanosomes. PLOS PATHOGENS, v. 14, n. 11 NOV 2018. Citações Web of Science: 1.
SILVA, MAKSWELL ALMEIDA; LOPES, DAIANA SILVA; TEIXEIRA, SAMUEL COTA; CIRILO GIMENES, SARAH NATALIE; VASCONCELOS AZEVEDO, FERNANDA VAN PETTEN; POLLONI, LORENA; BORGES, BRUNA CRISTINA; DA SILVA, MARCELO SANTOS; BARBOSA, MARCELO JOSE; DE OLIVEIRA JUNIOR, ROBSON JOSE; ELIAS, MARIA CAROLINA; DA SILVA, CLAUDIO VIEIRA; GERALDO YONEYAMA, KELLY APARECIDA; RODRIGUES, VERIDIANA DE MELO; RODRIGUES, RENATA SANTOS. Genotoxic effects of BnSP-6, a Lys-49 phospholipase A(2) (PLA(2)) homologue from Bothrops pauloensis snake venom, on MDA-MB-231 breast cancer cells. International Journal of Biological Macromolecules, v. 118, n. A, p. 311-319, OCT 15 2018. Citações Web of Science: 1.
ALVES, CERES LUCIANA; REPOLES, BRUNO MARCAL; DA SILVA, MARCELO SANTOS; MENDES, ISABELA CECILIA; MARIN, PAULA ANDREA; NASCIMENTO AGUIAR, PEDRO HENRIQUE; SANTOS, SELMA DA SILVA; FRANCO, GLORIA REGINA; MACEDO, ANDREA MARA; JUNHO PENA, SERGIO DANILO; ANDRADE, LUCIANA DE OLIVEIRA; GUARNERI, ALESSANDRA APARECIDA; TAHARA, ERICH BIRELLI; ELIAS, MARIA CAROLINA; MACHADO, CARLOS RENATO. The recombinase Rad51 plays a key role in events of genetic exchange in Trypanosoma cruzi. SCIENTIFIC REPORTS, v. 8, SEP 6 2018. Citações Web of Science: 1.
MARIN, PAULA ANDREA; DA SILVA, MARCELO SANTOS; PAVANI, RAPHAEL SOUZA; MACHADO, CARLOS RENATO; ELIAS, MARIA CAROLINA. Recruitment kinetics of the homologous recombination pathway in procyclic forms of Trypanosoma brucei after ionizing radiation treatment. SCIENTIFIC REPORTS, v. 8, MAR 29 2018. Citações Web of Science: 2.
DA SILVA, MARCELO S.; PAVANI, RAPHAEL S.; DAMASCENO, JEZIEL D.; MARQUES, CATARINA A.; MCCULLOCH, RICHARD; ORSINI TOSI, LUIZ RICARDO; ELIAS, MARIA CAROLINA. Nuclear DNA Replication in Trypanosomatids: There Are No Easy Methods for Solving Difficult Problems. Trends in Parasitology, v. 33, n. 11, p. 858-874, NOV 2017. Citações Web of Science: 7.
DA SILVA, MARCELO SANTOS; MARIN MUNOZ, PAULA ANDREA; ARMELIN, HUGO AGUIRRE; ELIAS, MARIA CAROLINA. Differences in the Detection of BrdU/EdU Incorporation Assays Alter the Calculation for G1, S, and G2 Phases of the Cell Cycle in Trypanosomatids. Journal of Eukaryotic Microbiology, v. 64, n. 6, p. 756-770, NOV-DEC 2017. Citações Web of Science: 7.
DA SILVA, MARCELO SANTOS; SEGATTO, MARCELA; PAVANI, RAPHAEL SOUZA; GUTIERREZ-RODRIGUES, FERNANDA; BISPO, VANDERSON DA SILVA; GENNARI DE MEDEIROS, MARISA HELENA; CALADO, RODRIGO TOCANTINS; ELIAS, MARIA CAROLINA; NOGUEIRA CANO, MARIA ISABEL. Consequences of acute oxidative stress in Leishmania amazonensis: From telomere shortening to the selection of the fittest parasites. BIOCHIMICA ET BIOPHYSICA ACTA-MOLECULAR CELL RESEARCH, v. 1864, n. 1, p. 138-150, JAN 2017. Citações Web of Science: 5.
PAVANI, RAPHAEL SOUZA; DA SILVA, MARCELO SANTOS; HENRIQUE FERNANDES, CARLOS ALEXANDRE; MORINI, FLAVIA SOUZA; ARAUJO, CHRISTIANE BEZERRA; DE MATTOS FONTES, MARCOS ROBERTO; SANT'ANNA, OSVALDO AUGUSTO; MACHADO, CARLOS RENATO; CANO, MARIA ISABEL; FRAGOSO, STENIO PERDIGAO; ELIAS, MARIA CAROLINA. Replication Protein A Presents Canonical Functions and Is Also Involved in the Differentiation Capacity of Trypanosoma cruzi. PLoS Neglected Tropical Diseases, v. 10, n. 12 DEC 2016. Citações Web of Science: 5.

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