Efeito do nanocompósito prata/B-glicerofosfato de cálcio sobre biofilmes de Candid...
- Auxílios pontuais (curta duração)
| Processo: | 15/00825-5 |
| Linha de fomento: | Bolsas no Brasil - Doutorado |
| Vigência (Início): | 01 de julho de 2015 |
| Vigência (Término): | 30 de novembro de 2018 |
| Área do conhecimento: | Ciências da Saúde - Odontologia - Odontopediatria |
| Convênio/Acordo: | Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) |
| Pesquisador responsável: | Alberto Carlos Botazzo Delbem |
| Beneficiário: | José Antonio Santos Souza |
| Instituição-sede: | Faculdade de Odontologia (FOA). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Araçatuba. Araçatuba , SP, Brasil |
| Bolsa(s) vinculada(s): | 16/22039-4 - Análise dos mecanismos moleculares de toxicidade e tolerância de cepas de C. albicans, C. glabrata e S. mutans a nanopartículas de Ag obtidas pela síntese 'green': uma abordagem à escala do genoma, BE.EP.DR |
| Assunto(s): | Tirosol Biofilmes Nanotecnologia |
Resumo O presente trabalho tem por objetivo propor a síntese e caracterização de um novo nanocompósito à base de nanopartículas de prata e nanopartículas de glicerofosfato de cálcio (Ag/glicerofosfato de cálcio) e avaliar sua ação sobre microrganismos planctônicos e biofilmes bacterianos e de levedura bem como seu efeito sobre células de polpa dental humana na presença e ausência de biofilmes. Primeiramente, nanopartículas de prata coloidal (5 nm) serão sintetizadas através da redução do nitrato de prata pela síntese "green" utilizando uma romã (Punica granatum L.) e nanopartículas de glicerofosfato de cálcio serão sintetizadas por meio de moagem de partículas convencionais de glicerofosfato de cálcio. Os dois compostos serão então associados buscando-se uma concentração em peso de 9% de fosfato. A síntese do nanocompósito será acompanhada por difração de raio-X e microscopia eletrônica de transmissão. Na sequência, de acordo com o método da microdiluição, será determinada a concentração inibitória mínima de Ag/glicerofosfato de cálcio capaz de inibir o crescimento de C. albicans e S. mutans nos estados planctônico e séssil. Posteriormente, será avaliado o efeito antimicrobiano do Ag/glicerofosfato em biofilmes pré-formados (24h) através da quantificação da atividade metabólica das células. Ainda, microrganismos planctônicos e biofilmes submetidos ou não a tratamento serão avaliados para a produção de cyclic-di-GMP através de cromatografia líquida combinada com espectrometria de massas (LC-MS) e mudança de expressão gênica através de "quantitative real-time PCR" (qPCR). Na sequência células de polpa dental humana serão obtidas a partir de tecido pulpar de dentes extraídos na clínica de cirurgia da Faculdade de Odontologia de Araçatuba - UNESP, culturas primárias (n=3) serão estabelecidas por meio da técnica explant e após a 4ª passagem serão utilizadas nos ensaios. Biofilmes de C. albicans e S. mutans serão formados (24 horas) sobre "inserts" e utilizados em modelos de co-cultura células de polpa/biofilme de ambas as espécies de microrganismos. O efeito de diferentes concentrações e períodos de tratamento com o nanocompósito sobre células de polpa dental humana na presença e ausência de biofilmes será avaliado através 1) da análise da proliferação celular por meio da técnica MTT, 2) da produção de fosfatase alcalina, sialofosfoproteína da dentina, proteína da matriz de dentina-1, colágeno tipo I e osteocalcina por meio de PCR tempo real, 3) da atividade da fosfatase alcalina por meio da liberação de timolftaleína pela hidrólise do substrato de timolftaleínamonofosfato, 4) e da detecção e quantificação da mineralização da matriz extracelular por meio da coloração vermelho de alizarina. Controles sem Ag/glicerofosfato de cálcio e com hidróxido de cálcio serão incluídos em todas as análises, e todos os testes serão realizados em triplicata em três ocasiões diferentes. Os dados serão submetidos ao teste de normalidade e, a seguir, será aplicada análise estatística adequada para cada resultado, com nível de significância de 5%. (AU) | |