Construção de cepas mutantes de Trichoderma reesei e análise de elementos regulató...
- Auxílios pontuais (curta duração)
| Processo: | 15/08222-8 |
| Linha de fomento: | Bolsas no Brasil - Doutorado |
| Vigência (Início): | 01 de julho de 2015 |
| Vigência (Término): | 04 de julho de 2019 |
| Área do conhecimento: | Ciências Biológicas - Genética - Genética Molecular e de Microorganismos |
| Convênio/Acordo: | Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) |
| Pesquisador responsável: | Juliana Velasco de Castro Oliveira |
| Beneficiário: | Gustavo Pagotto Borin |
| Instituição-sede: | Centro Nacional de Pesquisa em Energia e Materiais (CNPEM). Ministério da Ciência, Tecnologia, Inovações e Comunicações (Brasil). Campinas , SP, Brasil |
| Bolsa(s) vinculada(s): | 17/18987-7 - Construção de cepas mutantes de Trichoderma reesei e análise de elementos regulatórios para identificar e caracterizar novos genes com potencial biotecnológico na degradação de lignocelulose, BE.EP.DR |
| Assunto(s): | Trichoderma reesei Microbiologia Metabolômica |
Resumo A parede celular vegetal é uma estrutura recalcitrante, composta por polissacarídeos complexos que podem ser quebrados em açúcares fermentáveis, para a produção do que é denominado de etanol de segunda geração. A desconstrução desse material complexo pode ser feita por diversos tipos de enzimas hidrolíticas, que são produzidas naturalmente por uma variedade de microrganismos. Entre eles, o fungo Trichoderma reesei se destaca pela capacidade de produzir e secretar estas enzimas em grandes quantidades. Embora este fungo seja muito estudado como organismo modelo na desconstrução de lignocelulose, apenas recentemente abordagens de transcriptômica e proteômica com T. reesei RUT C30 crescido em duas biomassas vegetais de cana-de-açúcar foram realizados. Em um projeto de mestrado recentemente concluído pelo candidato foi avaliado o perfil de expressão e secreção de proteínas envolvidas na desconstrução da parede vegetal. O resultado do transcriptoma de T. reesei permitiu a identificação de uma série de genes diferencialmente expressos em colmo e bagaço de cana, os quais podem estar relacionados, direta ou indiretamente, à desconstrução e ao crescimento do fungo nesses substratos lignocelulósicos. Assim, este projeto de doutorado pretende dar continuidade a este projeto e estudar em mais detalhes os resultados obtidos. O objetivo da presente proposta é analisar a co-regulação de genes diferencialmente expressos no transcriptoma de T. reesei pela análise de uma rede de co-regulação gênica, bem como construir e validar cepas mutantes deste fungo para identificação de genes, até então de função desconhecida, que possam ser de interesse biotecnológico, como novas enzimas lignocelulolíticas. Serão construídos mutantes knockout e superexpressando os genes selecionados para verificar seus perfis lignocelulolíticos, através de testes de crescimento em meios contendo diferentes fontes de carbono complexas, medindo a atividade enzimática contra diversos substratos, verificando a quantidade de açúcar liberado durante a sacarificação, entre outros. Como objetivos adicionais, pretende-se clonar, expressar, purificar e caracterizar uma ou algumas proteínas codificadas pelos genes candidatos que apresentarem perfis mais interessantes nos mutantes, e também realizar e analisar a metabolômica de T. reesei quando crescido em biomassa de cana-de-açúcar para identificar as principais vias metabólicas utilizadas pelo fungo. Ao fim deste projeto, espera-se identificar genes com potencial para aumento da sacarificação da biomassa vegetal de cana e da produção do etanol 2G. (AU) | |