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Participação da glicosilação (O-GlcNAc) na HIPOR0REATIVIDADE vascular e hipotensão observada ao final da prenhez de ratas normotensas e espontaneamente hipertensas (SHR)

Processo: 15/08188-4
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
Vigência (Início): 01 de agosto de 2015
Vigência (Término): 31 de julho de 2016
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Farmacologia - Farmacologia Geral
Pesquisador responsável:Cristina Antoniali Silva
Beneficiário:Daniela de Souza Silva
Instituição-sede: Faculdade de Odontologia (FOA). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Araçatuba. Araçatuba , SP, Brasil
Assunto(s):Gravidez   Nariz   Hipertensão   Aorta

Resumo

As síndromes hipertensivas são as principais causas de morte materna em todo o mundo. Temos estudado o efeito fisiológico da prenhez sobre a pressão arterial, para melhor entendimento das alterações observadas na hipertensão associada a gravidez/prenhez, pré-eclampsia ou eclâmpsia. Pesquisas mostram que em ratas normotensas e hipertensas (SHR) há uma redução significativa da pressão arterial nos períodos finais da prenhez, a qual estaria diretamente associada a redução da atividade simpática perivascular em leitos mesentéricos ou em outros vasos. Além disso, respostas pressoras diminuídas frente a estimulação por agentes vasoconstritores como a fenilefrina, vasopressina, endotelina e serotonina foram observadas em leitos mesentéricos in situ ou isolados de ratas normotensas ou hipertensas (SHR) no final da prenhez. Essas alterações têm sido atribuídas a uma importante participação dos fatores relaxantes derivados do endotélio (EDFRs) com destaque ao óxido nítrico (NO) sobre o músculo liso vascular. Alguns estudos observaram que maior síntese de NO neste período ocorreria por meio da fosforilação da eNOS. Recentemente demonstramos maior fosforilação da NOSe dependente da atividade da via PI3-K/Akt em aortas de ratas normotensas e hipertensas prenhas (Zancheta et al., 2015). No entanto, tem sido sugerido que a glicosaminação (O-GlcNAc) da eNOS estaria envolvida na redução da fosforilação e da atividade da NOSe. Nossa hipótese é que a glicosaminação (O-GlcNAc) da eNOS esteja diminuída em aortas de ratas prenhas. O objetivo deste estudo será avaliar a participação da glicosaminação (O-GlcNAc) da eNOS na modulação endotelial da menor reatividade de aortas de ratas prenhas à fenilefrina, e avaliar possíveis alterações na expressão das proteínas envolvidas no processo de glicosaminação (O-GlcNAc) da eNOS, através de ensaios biomoleculares (Western Blotting) em aorta de ratas prenhas normotensas e hipertensas (SHR). Para atingirmos estes objetivos serão realizados experimentos in vitro para avaliarmos o efeito do PugNAc, inibidor da O-GlcNAc, na reatividade de aortas de ratas prenhas normotensas e hipertensas (SHR) à fenilefrina (PE). Compararemos as respostas de aortas, incubadas ou não com PugNAc, à PE (1nM a 10 ¼M). Também serão realizados ensaios biomoleculares (Western Blott) para avaliarmos a expressão de proteínas envolvidas na via de glicosaminação (O-GlcNAc) em aortas de ratas prenhas normotensas e hipertensas. Serão utilizados os anticorpos primários: O-GlcNAc (sc-59623, Santa Cruz) na diluição 1:1000 e O-GlcNAc transferase (sc-74547, Santa Cruz) na diluição de 1:1000. A expressão de ²-actina (1:8000) será utilizada para normalização dos resultados. Os resultados obtidos serão comparados entre anéis de aortas de ratas prenhas e em estro, normotensas e hipertensas, utilizando teste de variância two-way (ANOVA) seguido do teste Tukey. As diferenças entre os resultados serão consideradas significativas quando p< 0,05.