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Estudo da adsorção de fosfatase alcalina em monocamadas de Langmuir contendo microdomínios lipídicos ricos em colesterol

Processo: 15/03594-4
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Mestrado
Vigência (Início): 01 de agosto de 2015
Vigência (Término): 30 de junho de 2017
Área do conhecimento:Ciências Exatas e da Terra - Química - Físico-química
Convênio/Acordo: Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
Pesquisador responsável:Ana Paula Ramos
Beneficiário:Rafael Derradi
Instituição-sede: Faculdade de Filosofia, Ciências e Letras de Ribeirão Preto (FFCLRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
Assunto(s):Coloides   Colesterol   Fosfatase alcalina   Monocamadas de Langmuir

Resumo

A biomineralização é um processo complexo envolvendo várias enzimas, entre elas a fosfatase alcalina tecido não específica (TNAP). O estudo da TNAP inserida em sistemas modelo de membrana, como proteolipossomos e monocamadas de Langmuir, são promissores e podem auxiliar o entendimento de tal processo. O colesterol presente em microdomínios proteicos em membranas biológicas tem papel importante na regulação da atividade de enzimas e da biomineralização. O objetivo deste projeto é estudar os efeitos da presença de colesterol na adsorção da enzima fosfatase alcalina em sistemas biomiméticos de membranas obtidos utilizando-se monocamadas de Langmuir em domínios formados na ausência e presença de esfingolipídios, constituinte das chamadas "jangadas lipídicas" (do inglês lipid raft) ou ainda de microdomínios lipídicos. Para tal estudo, serão utilizadas monocamadas de Langmuir, com a obtenção de isotermas p x A, para diferentes composições de fosfolipídeo, esfingolipídeo e colesterol na presença e ausência de TNAP. A influência da presença de colesterol e da composição das monocamadas na formação e morfologia dos microdomínios lipo-proteicos será acompanhada por imagens de microscopia de fluorescência que serão obtidas utilizando-se uma cuba de Langmuir acoplada a um microscópio de fluorescência, utilizando colesterol e dipalmitoilfosfatidilcolina (DPPC) marcados com fluoróforo. Os sistemas também serão caracterizados por meio de medidas de tensão superficial dinâmica e reologia das monocamadas, utilizando-se o método da gota pendente. A vantagem destes sistemas quando comparados com os proteolipossomos é a possibilidade de determinar relações proteína/lipídeos, estimar áreas por unidade proteica, bem como as correlações com atividade/pressão, entre outras. Todos os estudos serão realizados sob co-orientação do Prof. Pietro Ciancaglini (DQ-FFCLRP). (AU)

Publicações científicas
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
DERRADI, R.; BOLEAN, M.; SIMAO, A. M. S.; CASELI, L.; MILLAN, J. L.; BOTTINI, M.; CIANCAGLINI, P.; RAMOS, A. P. Cholesterol Regulates the Incorporation and Catalytic Activity of Tissue-Nonspecific Alkaline Phosphatase in DPPC Monolayers. Langmuir, v. 35, n. 47, p. 15232-15241, NOV 26 2019. Citações Web of Science: 0.

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