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Exploração genética sobre os mecanismos de regulação do Sistema de Secreção do Tipo IV em Xanthomonas citri e como esse sistema medeia a morte contato-dependente

Processo: 15/18237-2
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
Vigência (Início): 01 de fevereiro de 2016
Vigência (Término): 31 de maio de 2019
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Microbiologia - Biologia e Fisiologia dos Microorganismos
Pesquisador responsável:Shaker Chuck Farah
Beneficiário:William Cenens
Instituição-sede: Instituto de Química (IQ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
Vinculado ao auxílio:17/17303-7 - Estrutura e função de sistemas de secreção bacterianas, AP.TEM
Assunto(s):Bioquímica

Resumo

Durante a morte de bactérias vizinhas induzida pelo Sistema de Secreção do Tipo IV (T4SS) por Xanthomonas citri (Xac), diversas proteínas efetoras são secretadas e injetadas nas células alvo por um mecanismo contato-dependente. O primeiro objetivo deste projeto será investigar a função dessas proteínas efetoras. A avaliação da atividade de deleção de diferentes mutantes efetores em bactérias de diferentes espécies permitirá a discriminação entre efeitos antibacterianos e reguladores de proteínas efetoras distintas. Além disso, a expressão ectópica e condicional de proteínas efetoras combinada com estudos em interação proteica irão indicar seus alvos celulares. O segundo objetivo deste projeto envolve estratégias de inserção de transposon no genoma completo (whole-genome transposon insertion strategies) para identificar todos os loci envolvidos durante a competição de Xac com outras espécies de bactérias. A utilização de "straightforward classical transposon screen" irá revelar mutantes em vias regulatórios, toxinas (além de componentes estruturais do T4SS) e esta busca será expandida por uma técnica de Tn-seq, aumentando drasticamente o conhecimento genético na competição interbacteriana de Xac. Ademais, este objetivo pode revelar mecanismos alternativos que podem funcionar independentemente ou conjuntamente com o T4SS durante a competição interbacteriana. Por fim, o ultimo objetivo deste projeto será a análise da regulação, organização e localização de T4SS durante a competição interbacteriana por meio da combinação de microscopia de fluorescência com resolução temporal com diferentes técnicas de marcação de fluorescência.