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Produção de embriões de truta arco-íris (Oncorhynchus mykiss) em células germinativas depletadas pelo knockout do gene dead end

Processo: 15/24148-2
Linha de fomento:Bolsas no Exterior - Estágio de Pesquisa - Pós-Doutorado
Vigência (Início): 28 de janeiro de 2016
Vigência (Término): 27 de maio de 2016
Área do conhecimento:Ciências Agrárias - Recursos Pesqueiros e Engenharia de Pesca - Recursos Pesqueiros de Águas Interiores
Pesquisador responsável:Rafael Henrique Nóbrega
Beneficiário:Melanie Digmayer
Supervisor no Exterior: Goro Yoshizaki
Instituição-sede: Instituto de Biociências (IBB). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Botucatu. Botucatu , SP, Brasil
Local de pesquisa : Tokyo University of Marine Science and Technology (TUMSAT), Japão  
Vinculado à bolsa:13/20450-0 - Marcadores moleculares e criopreservação de espermatogônias tronco de carpa comum, Cyprinus carpio e zebrafish, Danio rerio, BP.PD
Assunto(s):Aquicultura   Truta-arco-íris   Oncorhynchus mykiss   Células germinativas   Sistemas CRISPR-Cas   CRISPR-Cas9

Resumo

O sistema de "agrupados de curtas repetições palindrômicas regularmente interespaçadas" (CRISPR) associado a Cas é um método simples e eficiente para edição do genoma alvo. Devido à facilidade de produção de RNA alvo, o sistema CRISPR/Cas9 é uma ferramenta promissora para a engenharia genômica nas diversas áreas incluindo a aquicultura. Valiosos estoques substitutos de peixes têm sido alcançados por transplantes alogênicos e xenogênicos de células germinativas. Proles de truta provenientes de salmão são obtidas quando as células germinativas primordiais (PGC) de truta são injetadas em receptores recém-eclodidos de salmão. Entretanto, a eficiência desta técnica é baixa devido à competição entre as PGC endógenas e do doador para os nichos livres. O uso de células germinativas depletadas como receptores é uma alternativa para o aumento da eficiência do transplante. O gene dead end (dnd) é expresso especificamente nas PGCs e tem se mostrado essencial para a migração, manutenção e sobrevivência destas durante a embriogênese. O objetivo nesse projeto é gerar células de truta depletadas em dnd como receptoras, através do sistema CRISPR/Cas9. (AU)