Humanização e expressão da luciferase do vagalume Macrolampis sp2 para biosensor de pH intracelular

• Processo: 15/22603-4
• Modalidade de apoio: Bolsas no Exterior - Estágio de Pesquisa - Doutorado
• Vigência (Início): 01 de abril de 2016
• Vigência (Término): 30 de junho de 2016
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Biofísica - Radiologia e Fotobiologia
• Pesquisador responsável: Vadim Viviani
• Beneficiário: Gabriele Verônica de Mello Gabriel
• Supervisor: Yoshihiro Ohmiya
• Instituição Sede: Centro de Ciências e Tecnologias para a Sustentabilidade (CCTS). Universidade Federal de São Carlos (UFSCAR). Sorocaba , SP, Brasil
• Local de pesquisa: National Institute of Advanced Industrial Science and Technology, Tsukuba (AIST), Japão
• Vinculado à bolsa: 14/04477-9 - Desenvolvimento de biossensores raciométricos bioluminescentes de pH e metais divalentes baseados na engenharia da região sensível ao pH nas luciferases de vagalumes, BP.DR
• Assunto(s): Técnicas biossensoriais Luciferases
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: biossensores | luciferase | Macrolampis sp2 | pH intracelular | Bioluminescência, Luciferases

Resumo

Bioluminescência, a emissão de luz visível por organismos vivos, é amplamente utilizada em biossensores. Genes de luciferases de vagalumes estão entre os genes repórter mais utilizados em biossensores bioluminescentes. Luciferases de vagalume são pH-sensíveis exibindo um grande desvio do espectro para o vermelho em pH ácido, uma propriedade que tem sido considerada muito inútil para a maioria das aplicações. No entanto, atualmente biossensores de pH intracelulares estão em demanda, sendo alguns deles fluorescentes e raciométricos. Assim nós pensamos em usar a sensibilidade ao pH da luciferase do vagalume como uma vantagem de medir o pH intracelular raciometricamente. Nós já mostramos uma relação entre o pH e a razão de intensidades dos espectros de bioluminescência na região do verde e vermelho, que podem ser usadas para estimar raciometricamente o pH intracelular em bactérias. O objetivo deste projeto é usar a luciferase do vagalume Macrolampis sp2 como biossensor de pH intracelular em células de mamíferos. Para isso pretendemos humanizar a luciferase de Macrolampis sp2, expressá-la em células de mamíferos e investigar variações de pH intracelulares raciometricamente.

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

DE MELLO GABRIEL, GABRIELE VERONICA; YASUNO, RIE; MITANI, YASUO; OHMIYA, YOSHIHIRO; VIVIANI, VADIM RAVARA. Novel application of Macrolampis sp2 firefly luciferase for intracellular pH-biosensing in mammalian cells. PHOTOCHEMICAL & PHOTOBIOLOGICAL SCIENCES, v. 18, n. 5, p. 1212-1217, MAY 1 2019. (10/05426-8, 14/04477-9, 16/15946-5, 11/23961-0, 15/22603-4)