Análise e modulação da metilação da H3K9 em células somáticas de bovinos

• Processo: 15/25111-5
• Modalidade de apoio: Bolsas no Exterior - Estágio de Pesquisa - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2016
• Data de Término da vigência: 28 de fevereiro de 2017
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
• Pesquisador responsável: Flávio Vieira Meirelles
• Beneficiário: Rafael Vilar Sampaio
• Supervisor: Pablo Juan Ross
• Instituição Sede: Faculdade de Zootecnia e Engenharia de Alimentos (FZEA). Universidade de São Paulo (USP). Pirassununga , SP, Brasil
• Instituição Anfitriã: University of California, Davis (UC Davis), Estados Unidos
• Vinculado à bolsa: 15/08807-6 - Metilação da H3K9 como regulador da memória epigenética na reprogramação nuclear de bovinos., BP.PD
• Assunto(s): Biotecnologia da reprodução Biologia molecular Epigênese genética Metilação Histonas
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Biologia molecular | epigenética | transferência nuclear de células somáticas | Biotecnologias da Reprodução

Resumo

Os mecanismos epigenéticos são responsáveis por diversas funções celulares. Dentre eles, está a memória epigenética mantida durante a divisão celular. A consolidação desta informação é feita por estruturas químicas estáveis como a metilação do DNA e as modificações de histonas. O conhecimento destes mecanismos possibilita o desenvolvimento de diversas estudos, como a reprogramação nuclear, que é influenciada diretamente por estas marcas epigenéticas. Neste contexto, a metilação da H3K9 tem se mostrado como uma das principais barreiras no processo de remodelação nuclear. No entanto, pouco se sabe sobre o epigenoma de animais de interesse zootécnico. Por isso, o objetivo principal desta proposta é investigar os genes diretamente regulados pela metilação da H3K9, bem como modular o padrão destas modificações. Para isso elaboramos duas estratégias. A primeira consiste na identificação em fibroblastos fetais bovinos (ffb) de todos os genes regulados através da metilação da H3K9 por meio da análise por ChIP-seq utilizando os anticorpos anti-H3K9me2 e H3K9me3. Na segunda estratégia visamos alterar os níveis destas modificações nos ffbs. Para tal, as enzimas metiltransferases de histona (G9a e SUV39h1) serão silenciadas através da técnica de siRNA. Por último, os ffbs silenciados serão analisadas quanto aos níveis de H3K9me2, H3K9me3, 5mC e H3K27. Vale ressaltar que este BEPE será realizado no laboratório do Dr. Pablo J. Ross, que possui vasta experiência no campo da epigenética de animais de pecuária. Esta proposta é inovadora e esperamos com seu resultado gerar conhecimentos que poderão ser aplicados em diversas áreas. Além disso, o objetivo principal desta proposta é o treinamento e capacitação do candidato para a execução das diferentes técnicas e análises inovadoras. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

BOGLIOTTI, YANINA SOLEDAD; WU, JUN; VILARINO, MARCELA; OKAMURA, DAIJI; SOTO, DELIA ALBA; ZHONG, CUIQING; SAKURAI, MASAHIRO; SAMPAIO, RAFAEL VILAR; SUZUKI, KEIICHIRO; BELMONTE, JUAN CARLOS IZPISUA; et al. Efficient derivation of stable primed pluripotent embryonic stem cells from bovine blastocysts. PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES OF THE UNITED STATES OF AMERICA, v. 115, n. 9, p. 2090-2095, FEB 27 2018. (15/25111-5, 13/08135-2)

SAMPAIO, RAFAEL VILAR; SANGALLI, JULIANO RODRIGUES; CAMARA DE BEM, TIAGO HENRIQUE; AMBRIZI, DEWISON RICARDO; DEL COLLADO, MAITE; BRIDI, ALESSANDRA; CAVALCANTE MENDES DE AVILA, ANA CLARA FAQUINELI; MACABELLI, CAROLINA HABERMANN; OLIVEIRA, LILIAN DE JESUS; DA SILVEIRA, JULIANO COELHO; et al. Catalytic inhibition of H3K9me2 writers disturbs epigenetic marks during bovine nuclear reprogramming. SCIENTIFIC REPORTS, v. 10, n. 1, JUL 13 2020. (15/08807-6, 14/22887-0, 13/08135-2, 14/50947-7, 14/21034-3, 15/25111-5, 12/50533-2, 13/07160-3)