Análise da influência dos reguladores transcricionais VicRK e CovR na baixa susceptibilidade de cepas Streptococcus mutans isoladas de sangue à opsonização pelo sistema complemento

• Processo: 15/22967-6
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de fevereiro de 2016
• Data de Término da vigência: 31 de janeiro de 2018
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Odontologia
• Pesquisador responsável: Renata de Oliveira Mattos Graner
• Beneficiário: Letícia Tank Oliveira
• Instituição Sede: Faculdade de Odontologia de Piracicaba (FOP). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Piracicaba , SP, Brasil
• Assunto(s): Imunologia oral Sistema do complemento Polimorfismo genético Suscetibilidade Elementos reguladores de transcrição Streptococcus mutans Fatores de virulência Reação em cadeia da polimerase via transcriptase reversa quantitativa (qRT-PCR)
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Fatores de virulência | Opsonização | Regulação da trascrição genica | sistema complemento | Sistema de dois componentes | Streptococcus mutans | Microbiologia e Imunologia Oral

Resumo

Streptococcus mutans (SM) é uma espécie bacteriana comum da cavidade bucal de humanos envolvida na patogenia da cárie dental, a qual pode promover endocardites bacterianas ao obter acesso à corrente sanguínea. Pouco se sabe, sobre os fatores de virulência envolvidos na capacidade desta espécie de sobreviver em sangue e/ou causar infecções sistêmicas. Durante o processo de colonização e/ou infecção do hospedeiro, SM sofre diversas alterações no seu transcriptoma em resposta aos estímulos ambientais, as quais são, em parte, controladas por sistemas reguladores transcricionais de dois componentes (SDC). SM possui 14 SDCs, os quais são tipicamente compostos por uma proteína sensora de membrana histidina quinase (K) e uma proteína intracelular reguladora (regulador de resposta, R) codificada por genes organizados na forma de um operon. Além disto, S. mutans expressa a proteína reguladora CovR sem sua proteína K cognata. Em outras espécies de patogênicas de estreptococos, CovR é fosforilado pela proteína K sensora cognata CovS e reprime a expressão de proteínas de parede celular e secretadas implicadas no escape a fatores imunológicos incluindo-se fatores anti-opsonizantes. Em S. mutans, CovR é fosforilado pela proteína VicK do SDC VicRK. Recentemente, verificamos que a inativação do gene codificador de CovR (covR) na cepa SM UA159 reduz significativamente a deposição de C3b/iC3b do sistema complemento, um dos principais fatores opsonizantes do sangue. Além disto, o mutante covR é menos susceptível à fagocitose por PMN humanos e tem maior sobrevida em sangue. Análises das intensidades de ligação de C3b às superfícies de diversos isolados S. mutans revela diferenças na suspeptibilidade à deposição de C3b, sendo que cepas pouco susceptíveis à deposição de C3b são mais frequentes entre isolados de sangue. O objetivo deste projeto é investigar o papel dos reguladores CovR e VicRK na resistência de isolados de sangue de S. mutans à deposição de C3b do sistema complemento. Para isto, serão avaliadas quatro cepas isoladas de sangue identificadas pelo nosso grupo como de baixa susceptibilidade à deposição de C3b, as quais serão comparadas a quatro isolados de boca susceptíveis à deposição de C3b e com a cepa referência UA159. Polimorfismos no locus de covR e vicRK serão investigados através do sequenciamento de amplicons obtidos com primers para regiões que flanqueiam as regiões promotoras e codificadoras destes genes. A expressão de covR, vicK e vicR será comparada entre os isolados por RT-PCRq e confrontada com polimorfismos gênicos. Perfis de proteínas de superfície produzidas por estas cepas serão comparados através de análises dos extratos totais e de fluídos de cultura dos isolados com as cepas mutantes knockout de covR e vicK obtidas em UA159. Os resultados deste estudo serão importantes para explicar o papel de CovR e VicRK na susceptibilidade de S. mutans à opsonização pelo sistema complemento, os quais poderão ser alvos terapêuticos para o crontrole de bacteremias e infecções sistêmicas por estes microrganismos.

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

OLIVEIRA, LETICIA T.; ALVES, LIVIA A.; HARTH-CHU, ERIKA N.; NOMURA, RYOTA; NAKANO, KAZUHIKO; MATTOS-GRANER, RENATA O.. icRK and CovR polymorphisms in Streptococcus mutans strains associated with cardiovascular infection. Journal of Medical Microbiology, v. 70, n. 12, 2021. (15/22967-6, 18/02054-4, 17/19899-4)