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Desenvolvimento e otimização de metodologias bidimensionais de cromatografia líquida acopladas a bioensaios para a descoberta de inibidores enzimáticos em extratos de produtos naturais

Processo: 16/02941-5
Linha de fomento:Bolsas no Exterior - Estágio de Pesquisa - Pós-Doutorado
Vigência (Início): 01 de junho de 2016
Vigência (Término): 31 de janeiro de 2017
Área do conhecimento:Ciências Exatas e da Terra - Química - Química Orgânica
Pesquisador responsável:Carmen Lúcia Cardoso
Beneficiário:Cláudia Seidl
Supervisor no Exterior: Dwight Robert Stoll II
Instituição-sede: Faculdade de Filosofia, Ciências e Letras de Ribeirão Preto (FFCLRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
Local de pesquisa : Gustavus Adolphus College, Estados Unidos  
Vinculado à bolsa:14/11640-3 - Métodos LC-MS/2D para triagem de ligantes para a avaliação de atividade inibitória de enzimas e identificação dos compostos ativos em extratos brutos, BP.PD
Assunto(s):Produtos naturais

Resumo

A identificação de substâncias com atividade biológica em extratos naturais ou coleções de substâncias sintéticas é um passo crucial e requer a utilização de técnicas rápidas e eficientes para a separação e triagem. Este paradigma estimula o desenvolvimento de novos métodos de triagem para facilitar e reduzir o tempo necessário para identificar tais substâncias. Empregando técnicas de cromatografia, o isolamento de princípios ativos derivados de um extrato natural pode excepcionalmente ser conseguido num único passo cromatográfico. O uso de métodos cromatográficos bidimensionais (2D) é uma estratégia valiosa para se obter uma maior eficiência de separação. Métodos de separação clássicos de extratos naturais envolvem alto consumo de tempo, enquanto triagem offline não resultam em informações sobre compostos individuais e muitas vezes têm resultados falsos positivos ou falsos negativos. Uma alternativa promissora é o acoplamento de técnicas de separação cromatográfica, em particular as multi-dimensionais, com ensaios biológicos (isto é, elevado rendimento de rastreio). Assim, é possível detectar atividade biológica diretamente no efluente da cromatografia líquida e quimicamente caracterizar os compostos com atividade biológica on-line, utilizando espectrometria de massa (MS), resultando na redução do tempo e trabalho. Para a realização de ensaios biológicos on-line, o uso de enzimas imobilizadas é uma ótima opção. Neste contexto, o objetivo deste projeto é desenvolver um método rápido para a identificação on-line de componentes bioativos de extratos de plantas sem a necessidade de purificação prévia. Extratos de plantas, em primeiro lugar serão separados na primeira dimensão e os compostos são separados serão transferidos para o biorreator, onde a atividade biológica de cada composto ou um pequeno grupo de compostos será medida. ICERs (do inglês immobilized capillary enzyme reactors) que contêm a enzima acetilcolinesterase (AChE) e butirilcolinesterase (BChE), foram desenvolvidos em nosso grupo de pesquisa e foram selecionados como alvos enzimáticos modelo para este projeto. Estas enzimas são hidrolases de serina responsáveis pela catálise da hidrólise do neurotransmissor acetilcolina nas terminações nervosas e nas sinapses. Estes são alvos de interesse em estudos do desenvolvimento de fármacos para a doença de Alzheimer. (AU)

Publicações científicas
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
SEIDL, CLAUDIA; BELL, DAVID S.; STOLL, DWIGHT R. A study of the re-equilibration of hydrophilic interaction columns with a focus on viability for use in two-dimensional liquid chromatography. Journal of Chromatography A, v. 1604, OCT 25 2019. Citações Web of Science: 0.
STOLL, DWIGHT R.; SEIDL, CLAUDIA. Eluent Preparation for Hydrophilic Interaction Liquid Chromatography, Part II: pH, Buffers, and Gradient Elution. LC GC NORTH AMERICA, v. 36, n. 3, p. 170-177, MAR 2018. Citações Web of Science: 1.
LUCY, CHARLES A.; CRAVEN, CALEY B.; SEIDL, CLAUDIA; STOLL, DWIGHT R. Fluent Preparation for Hydrophilic Interaction Liquid Chromatography, Part I: Solvent Volumes and Buffer Counterions. LC GC NORTH AMERICA, v. 36, n. 1, p. 18-24, JAN 2018. Citações Web of Science: 2.

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