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Caracterização do perfil de expressão do RNAm BhC4-1-LacZ em embriões de linhagens das séries (-824/-187), (-488/-187) e (-850/+40) de D. melanogaster

Processo: 16/00412-5
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
Vigência (Início): 01 de julho de 2016
Vigência (Término): 30 de junho de 2018
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
Pesquisador responsável:Nadia Monesi
Beneficiário:João Vitor Cardoso Uliana
Instituição-sede: Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto (FCFRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
Assunto(s):Expressão gênica   Transcrição genética   Hibridização in situ   Drosophila melanogaster   In situ
Palavra(s)-Chave do Pesquisador:ensaios funcionais em D | expressão gênica | genes de pufes de DNA | Hibridação in situ | melanogaster | repressores transcricionais | Controle da transcrição gênica.

Resumo

O gene BhC4-1 do pufe de DNA C4 de Bradysia hygida é amplificado e expresso de modo regulado no desenvolvimento em dois tecidos larvais, a glândula salivar e glândula protorácica. Estudos funcionais realizados em D. melanogaster revelaram que os mecanismos reguladores da expressão do gene BhC4-1 encontram-se conservados em D. melanogaster e resultaram na identificação de módulos cis-reguladores que regulam a expressão deste gene de sciarídeo. Dentre os módulos identificados, o módulo (-253/-187) regula a expressão de BhC4-1-lacZ na glândula anelar a partir de embriões tardios, enquanto que o módulo cis-repressor distal (-3314/-1294) reprime a expressão de BhC4-1-lacZ na glândula anelar em tempos anteriores à pré-pupas 0h e o módulo cis-repressor proximal (-1293/-254) reprime a expressão de BhC4-1-lacZ na glândula anelar em tempos anteriores ao segundo instar larval. Em nosso laboratório foram geradas linhagens transformadas com as construções (-824/-187) e (-488/-187), desenhadas para estender a caracterização funcional do módulo repressor proximal. Nestas linhagens o módulo ativador de glândula anelar (-253/-187) encontra-se à jusante dos fragmentos (-824/-254) ou (-488/-254) e a expressão do repórter ocorre tanto na glândula anelar a partir do segundo instar larval (L2), como ectopicamente em células da epiderme de embriões. Os níveis de expressão ectópica da proteína repórter na epiderme de embriões parecem ser maiores nas linhagens das séries (-824/-187) e (-488/-187) quando comparado ao observado em linhagens da série (-850/+40), o que pode estar indicando a existência de um módulo repressor do padrão de expressão ectópico no fragmento (-186/+40). Este conjunto de linhagens foi analisado apenas quanto ao padrão de expressão da proteína repórter. O presente projeto pretende refinar a caracterização do padrão de expressão do transgene nas linhagens das séries (-824/-187), (-488/-187) e (-850/+40), através da investigação do padrão de expressão do RNAm BhC4-1-lacZ empregando experimentos de hibridação in situ. Com estes experimentos será possível comparar os níveis de expressão do RNAm do transgene nas células da epiderme de embriões nas linhagens (-824/-187) com o observado nas linhagens (-850/+40), o que permitirá confirmar a existência de módulos cis-repressores da expressão ectópica no fragmento (-186/+40). Em conjunto, os experimentos aqui propostos são uma etapa importante na caracterização do promotor de BhC4-1, servirão como ponto de partida para o desenho de experimentos futuros e contribuirão com informações acerca de módulos cis-reguladores presentes em um promotor de eucarioto.(AU)

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Publicações científicas
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
CARDOSO ULIANA, JOAO VITOR; PEREIRA BRANCINI, GUILHERME THOMAZ; CASTELLI-GAIR HOMBRIA, JAMES; DIGIAMPIETRI, LUCIANO ANTONIO; ANDRIOLI, LUIZ PAULO; MONESI, NADIA. Characterizing the embryonic development of B. hygida (Diptera: Sciaridae) following enzymatic treatment to permeabilize the serosal cuticle. MECHANISMS OF DEVELOPMENT, v. 154, p. 270-276, . (16/25325-8, 16/00412-5, 15/24305-0, 14/14318-5)

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