Busca avançada
Ano de início
Entree

Estudos do core complex do T4SS de Xanthomonas citri por crio-microscopia eletrônica

Processo: 16/13824-0
Linha de fomento:Bolsas no Exterior - Estágio de Pesquisa - Pós-Doutorado
Vigência (Início): 01 de outubro de 2016
Vigência (Término): 30 de setembro de 2017
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica - Química de Macromoléculas
Pesquisador responsável:Shaker Chuck Farah
Beneficiário:Germán Gustavo Sgro
Supervisor no Exterior: Gabriel Waksman
Instituição-sede: Instituto de Química (IQ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
Local de pesquisa : University of London, Inglaterra  
Vinculado à bolsa:14/04294-1 - Estudos estruturais e funcionais do Sistema de Secreção do Tipo IV de Xanthomonas citri, BP.PD
Assunto(s):Biologia estrutural   Xanthomonas

Resumo

Um dos principais objetivos deste projeto de pós-doutorado é a obtenção de informação estrutural sobre o complexo central (core complex) do Sistema de Secreção de Tipo IV de Xanthomonas citri, o qual forma o poro através de ambas camadas de membrana (interna e externa) do envelope bacteriano. Este complexo é composto de 14 cópias de cada uma das subunidades VirB7, VirB9 e VirB10. Devido ao grande tamanho deste complexo (~1,2 MDa) e sua associação com a membrana bacteriana, o método de escolha para a análise estrutural é a técnica de Cryo-microscopia eletrônica (Cryo-EM). Até agora, avançamos significativamente no nosso trabalho sobre o core complex do T4SS de Xanthomonas. Começando com a sua expressão em E. coli, fomos capazes de purificá-lo da membrana usando detergentes suaves em combinação com cromatografia de afinidade e de exclusão por tamanho. A caracterização inicial das partículas, utilizando microscopia electrónica por contraste negativo (NS-EM) indicam que elas são de formato toroidal, com uma simetria semelhante ou igual à simetria C14 observada para os complexos dos plasmídeos conjugativos pKM101 e R388 descritos pelo grupo do Dr. Gabriel Waksman no Birbeck College, Londres. Além disso, recentemente tivemos sucesso na preparação de grades para análise por Cryo-EM. Estes resultados preliminares, obtidos em colaboração com o grupo do Dr. Rodrigo Portugal no Laboratório Nacional de Nanotecnologia (LNNano-CNPEM) em Campinas, são extremamente promissores e sugerem que estamos muito perto de estar prontos para recolher conjuntos de dados definitivos de NS-EM e Cryo-EM para construir modelos 3D do complexo central do T4SS de Xac. Estes modelos nos dará as primeiras vistas estruturais na organização do invulgar T4SS das Xanthomonadaceae e vai proporcionar avanços significativos em nossa compreensão da forma como esta máquina realiza a sua função ao nível molecular. Para atingir este objetivo, temos estabelecido uma colaboração com um laboratório de classe mundial com a expertise e infra-estrutura necessárias para realizar a análise de microscopia eletrônica de alta resolução, bem como experiência em estudos estruturais dos T4SSs. A presente proposta de uma bolsa de estudos BEPE descreve nossos planos para uma visita de 6 meses para o laboratório do Dr. Gabriel Waksman no Birkbeck College, em Londres. Durante esta visita, o Dr. Germán Sgro terá acesso a uma infra-estrutura altamente moderna de Cryo-EM e terá oportunidade de interagir intensamente com um grupo poderosamente competente que se especializa em estudos de EM de sistemas de secreção bacterianos.

Mapa da distribuição dos acessos desta página
Para ver o sumário de acessos desta página, clique aqui.