Nox2 e proteínas de reparo de membrana na atrofia muscular induzida por alívio da carga.

• Processo: 16/15586-9
• Modalidade de apoio: Bolsas no Exterior - Estágio de Pesquisa - Doutorado
• Data de Início da vigência: 16 de janeiro de 2017
• Data de Término da vigência: 15 de janeiro de 2018
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Medicina - Clínica Médica
• Pesquisador responsável: Marina Politi Okoshi
• Beneficiário: Mariana Janini Gomes
• Supervisor: John M. Lawler
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina (FMB). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Botucatu. Botucatu , SP, Brasil
• Instituição Anfitriã: Texas A&M University, Estados Unidos
• Vinculado à bolsa: 14/23592-3 - Influência do exercício físico, aeróbio ou resistido, sobre a musculatura esquelética de ratos com infarto do miocárdio, BP.DR
• Assunto(s): Estresse oxidativo Sistema musculoesquelético
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: atrophy | Oxidative stress | skeletal muscle | unloading | Clínica Médica Geral

Resumo

Várias doenças crônicas e condições associadas à inatividade muscular prolongada podem induzir atrofia muscular. Independentemente da causa, atrofia do músculo esquelético resulta em fraqueza muscular e diminuição da qualidade de vida. Alívio da carga mecânica, que ocorre com o engessamento do membro, talas, repouso na cama e voo espacial resultam em perda substancial de capacidade de geração de força, associada a uma diminuição da área de secção transversal da fibra muscular. Estudos recentes demonstraram que o desarranjo do músculo esquelético em resposta ao alívio da carga mecânica é acelerado pela translocação da óxido nítrico sintase neuronal (nNOS) do sarcolema para o sarcoplasma. O estresse oxidativo elevado proveniente da mitocôndria e, possivelmente, da Nox2 pode resultar em perda ou translocação da nNOS do sarcolema para o sarcoplasma. No entanto, o "sistema de escada rolante" que separa e transporta a nNOS¼ é desconhecido. Portanto, o objetivo deste estudo é identificar a influência de espécies reativas de oxigênio sobre a regulação das proteínas reparadoras de membrana (disferlina, anexina-2, anexina-6 e MG53) e a translocação de nNOS¼ no músculo esquelético submetido a alívio de carga mecânica. Ratos Fischer-344 serão utilizados como modelo de desuso por meio de alívio de carga mecânica dos membros posteriores. Resumidamente, os membros posteriores dos grupos com alívio de carga mecânica (HU) serão elevados para uma orientação espinal de 55° acima da horizontal. Inibição de Nox2 será realizada via gp91ds-TAT (3 ug / ml), com uma sequência scrambled utilizada como controle. Os seguintes grupos de 12 semanas de idade serão testados: (n = 10/grupo): (1) controle + injecções de solução salina (CON), (2) controle + gp91ds-TAT (CG), (3) alívio de carga mecânica dos membros posteriores + injeções de solução salina (SHU), (4) alívio de carga mecânica dos membros posteriores + gp91ds-tat (HUN). Após 7 dias de alívio de carga mecânica, o músculo sóleo será congelado rapidamente. Marcadores de estresse oxidativo, Nox2, translocação de nNOS, fosforilação de FOXO3a [Thr-32], proteínas de reparo da membrana, e morfologia (área seccional transversa da fibra muscular e tipo de fibra muscular) serão avaliados utilizando imunofluorescência, co-imunoprecipitação coloração de hematoxilina e eosina, e técnica de Western blot. ANOVA de uma via com pós teste LSD de Fisher serão utilizados para distinguir diferenças entre as médias dos grupos. O nível de significância estatística será fixado em ± = 0,05.