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Cafeína, Trigonelina e Ácido Clorogênico: Modulação da expressão de miRNAs na Hepatocarcinogênese associada à Fibrose.

Processo: 16/12015-0
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Doutorado
Vigência (Início): 01 de janeiro de 2017
Vigência (Término): 29 de fevereiro de 2020
Área do conhecimento:Ciências da Saúde - Nutrição
Pesquisador responsável:Luís Fernando Barbisan
Beneficiário:Guilherme Ribeiro Romualdo
Instituição-sede: Instituto de Biociências (IBB). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Botucatu. Botucatu , SP, Brasil
Assunto(s):Ácido clorogênico   MicroRNAs   Camundongos   Cafeína

Resumo

Nos últimos anos, os processos fibrose e carcinogênese hepática têm sido relacionados à expressão alterada de diversos miRNAs. Em contraste, estudos indicam que o consumo da bebida café está relacionado com risco 40% menor de desenvolver fibrose ou câncer hepático. Assim, o projeto avaliará se a cafeína isoladamente ou associada à trigonelina e/ou ao ácido clorogênico (ACG): (A) atenua a hepatocarcinogênese associada à fibrose (HAF) em camundongos; (B) atenua a fibrose em co-cultura de hepatócitos tumorais e células estreladas hepáticas (CEHs) e (C) altera o perfil de expressão global de miRNAs e a expressão de genes-alvo dos miRNAs diferencialmente expressos no fígado. In vivo: para a indução da HAF, camundongos C3H/He machos receberão dose única de dietilnitrosamina (intraperitoneal [i.p.], 50 mg/Kg peso corpóreo [p.c.]) no 14º dia pós-natal (DPN). A partir da 8ª até 16ª semana, os animais receberão três doses semanais de tetracloreto de carbono (i.p., dose inicial de 0.25 mg/Kg p.c. e dose máxima de 1.25 mg/Kg p.c.). Além disso, da 7ª até a 17ª semana (1x/dia, 5x/semana), os animais receberão por gavagem cafeína (50 mg/Kg p.c./dia); cafeína e trigonelina (50 e 25 mg/Kg p.c./dia, respectivamente); cafeína e ACG (50 e 25 mg/Kg p.c./dia); cafeína, trigonelina e ACG (50, 25 e 25 mg/Kg p.c./dia) ou somente o veículo (água destilada). Os animais serão eutanasiados ao final da 17ª semana. Amostras hepáticas serão destinadas às análises histológicas: histopatologia (HE), quantificação de fibras colágenas (Picro Sirius Red) e reação de imunoistoquímica para os marcadores de CEHs ativadas (desmina e ±-SMA), macrófagos (F4/80), lesões pré-neoplásicas (CK8/18), proliferação celular (Ki-67) e apoptose (caspase-3 clivada). Também será realizada análise da expressão global de miRNAs (nCounter miRNA Expression Assay). Após identificação dos miRNAs diferencialmente expressos, será realizada predição bioinformática de genes alvos. As listas de genes preditos serão utilizadas para a avaliação da expressão de mRNAs, por RT-qPCR. In vitro: Será realizado co-cultivo 3D de hepatócitos (C3A) e CEHs humanas (LX-2). Inicialmente, a ativação das células estreladas será induzida por tratamento com lipopolissacarídeo (LPS) . Em sequência, a co-cultura será exposta à cafeína (10, 5 ou 2.5 mM), trigonelina (5, 2.5 ou 1.25 mM) ou ACG (5, 2.5 ou 1.25 mM) isoladamente ou em associação durante 24 e 48 horas. Amostras do co-cultivo serão destinadas às análises histológicas: HE, Picro Sirius Red e imunofluorescência para a contagem de CEHs. Outras amostras serão destinadas à determinação de colágeno I e de citocinas pró-inflamatórias (IL-6, TNF-±, TGF²-1,I-17A e IL-23) por ELISA. Ademais, será avaliada a expressão gênica do colágeno ±1(I), ±-SMA, TGF²-1, MMP-2, MMP-9, MMP-1 e TIMP-1 por qRT-PCR. Por fim, os dados serão analisados estatisticamente por ANOVA ou o teste de Kruskal-Wallis. O nível de significância adotado será de p<0.05.

Publicações científicas (5)
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
ROMUALDO, GUILHERME RIBEIRO; PRATA, GABRIEL BACIL; DA SILVA, TEREZA CRISTINA; EVANGELISTA, ADRIANE FEIJO; REIS, RUI MANUEL; VINKEN, MATHIEU; MORENO, FERNANDO SALVADOR; COGLIATI, BRUNO; BARBISAN, LUIS FERNANDO. The combination of coffee compounds attenuates early fibrosis-associated hepatocarcinogenesis in mice: involvement of miRNA profile modulation. JOURNAL OF NUTRITIONAL BIOCHEMISTRY, v. 85, NOV 2020. Citações Web of Science: 0.
RAMOS CAETANO, BRUNNO FELIPE; TABLAS, MARIANA BAPTISTA; ROMUALDO, GUILHERME RIBEIRO; MARCHESAN RODRIGUES, MARIA APARECIDA; BARBISAN, LUIS FERNANDO. Early molecular events associated with liver and colon sub-acute responses to 1,2-dimethylhydrazine: Potential implications on preneoplastic and neoplastic lesion development. Toxicology Letters, v. 329, p. 67-79, SEP 1 2020. Citações Web of Science: 0.
SARMIENTO-MACHADO, LUIS MANUEL; ROMUALDO, GUILHERME RIBEIRO; ZAPATERINI, JOYCE REGINA; TABLAS, MARIANA BAPTISTA; HENRIQUE FERNANDES, ANA ANGELICA; MORENO, FERNANDO SALVADOR; BARBISAN, LUIS FERNANDO. Protective Effects of Dietary Capsaicin on the Initiation Step of a Two-Stage Hepatocarcinogenesis Rat Model. NUTRITION AND CANCER-AN INTERNATIONAL JOURNAL, MAY 2020. Citações Web of Science: 0.
ROMUALDO, GUILHERME R.; SILVA, ELIZANGELA DOS ANJOS; DA SILVA, TEREZA C.; ALOIA, THIAGO P. A.; NOGUEIRA, MARINA S.; DE CASTRO, INAR A.; VINKEN, MATHIEU; BARBISAN, LUIS F.; COGLIATI, BRUNO. Burdock (Arctium lappa L.) root attenuates preneoplastic lesion development in a diet and thioacetamide-induced model of steatohepatitis-associated hepatocarcinogenesis. ENVIRONMENTAL TOXICOLOGY, v. 35, n. 4 DEC 2019. Citações Web of Science: 0.
ROMUALDO, GUILHERME RIBEIRO; ROCHA, ARIANE BARTOLOMEU; VINKEN, MATHIEU; COGLIATI, BRUNO; MORENO, FERNANDO SALVADOR; GARCIA CHAVES, MARIA ANGEL; BARBISAN, LUIS FERNANDO. Drinking for protection? Epidemiological and experimental evidence on the beneficial effects of coffee or major coffee compounds against gastrointestinal and liver carcinogenesis. Food Research International, v. 123, p. 567-589, SEP 2019. Citações Web of Science: 1.
Publicações acadêmicas
(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)
ROMUALDO, Guilherme Ribeiro. Cafeína, trigonelina e ácido clorogênico modulação da expressão de miRNAs na hepatocarcinogênese associada à fibrose. 2020. Tese de Doutorado - Universidade Estadual Paulista "Júlio de Mesquita Filho" Faculdade de Medicina..

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