| Processo: | 16/22307-9 |
| Modalidade de apoio: | Bolsas no Exterior - Estágio de Pesquisa - Doutorado |
| Data de Início da vigência: | 01 de abril de 2017 |
| Data de Término da vigência: | 30 de novembro de 2017 |
| Área de conhecimento: | Ciências Biológicas - Genética - Genética Humana e Médica |
| Pesquisador responsável: | Wilson Araújo da Silva Junior |
| Beneficiário: | Bruna Rodrigues Muys |
| Supervisor: | Markus Hafner |
| Instituição Sede: | Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil |
| Instituição Anfitriã: | National Institutes of Health, Bethesda (NIH), Estados Unidos |
| Vinculado à bolsa: | 13/25326-6 - Estudo funcional dos microRNAs miR-450a e miR-450b-5p na tumorigênese, BP.DR |
| Assunto(s): | Neoplasias ovarianas MicroRNAs |
| Palavra(s)-Chave do Pesquisador: | Câncer de ovário | miRNAs | Câncer de ovário e RNAs não codificadores |
Resumo O câncer de ovário é câncer ginecológico mais letal existente, sendo que a maioria dos pacientes têm uma taxa de sobrevivência menor que cinco anos após o diagnóstico, devido à falta de sintomas em seus estágios iniciais. Portanto, há uma necessidade urgente de desenvolver biomarcadores para ajudar a diagnosticar o câncer de ovário em seu início. MicroRNAs (miRNAs) são pequenas moléculas de RNA não codificadoras que atuam regulando processos biológicos críticos, tais como o desenvolvimento, proliferação celular, diferenciação, metabolismo e apoptose. Muitos miRNAs estão associados com a tumorigênese, e alguns deles funcionam como oncogenes ou genes supressores tumorais. MiRNAs desempenham um papel importante na regulação pós-transcricional e inibem a expressão de genes guiando o chamado complexo de silenciamento induzido por RNAs em direção a sequencias com sítios parcialmente complementares encontrados principalmente nas regiões não traduzidas de mRNAs alvo. Dados de estudos conduzidos como parte do meu doutoramento revelaram que os miRNAs miR-450a e miR-450b-5p são pouco explorados e predominantemente subexpressos em linhas celulares tumorais de ovário em comparação com tecidos normais correspondentes. O estudo também mostrou que ambos os miRNAs prejudicaram a migração e invasão em modelos de cultura de células bem estabelecidos de linhagens celulares de tumor de ovário (A2780 e SKOV-3). Além disso, a superexpressão de miR-450a resultou em uma taxa mais elevada de anoikis nas células A2780 e SKOV-3. Adicionalmente, com o objetivo de identificar alvos dos miRNAs miR-450a e miR-450b, nós realizamos o RNA-Seq para gerar o perfil do transcriptoma de células A2780 com superexpressão miR-450a (A2780+pLVX-miR-450a) ou miR-450b (A2780+pLVX miR-450b) comparadas com a linhagem controle A2780 +pLVX). Entre as vias mais enriquecidas encontrava-se a via de "Interações de superfícies celulares da família das Integrinas". Esse dado é consistente com o fenótipo de migração e invasão observado. Enquanto a análise de RNA-Seq revelou múltiplos genes com expressão modificada, as alterações de expressão podem ser diretas ou indiretas. O objetivo deste projeto é encontrar alvos dos miRNAs miR-450a e miR-450b para entender melhor sua função no sistema do câncer de ovário. Pretendemos realizar a técnica Argonaute (AGO) PAR-CLIP (Photoactivatable Ribonucleoside Enhanced Crosslinking e Immunoprecipitation) para identificar de forma abrangente os alvos dos miRNAs nas linhagens SKOV3 e A2780. O PAR-CLIP é um método baseado em sequenciamento de próxima geração (NSG) que permite a identificação de alvos de miRNAs e sítios de ligação de proteínas de ligação a RNAs (RBP) em uma escala transcriptômica e resolução de nucleotídeos. O AGO PAR-CLIP revelará transcritos sob o controle direto do miRNAs miR-450a ou miR-450b, bem como a competição e sinergia dentro da rede reguladora controlada por miRNAs. O método PAR-CLIP e a análise posterior serão realizadas em colaboração com o Dr. Markus Hafner, que os desenvolveu. Esse conhecimento nos permitirá identificar novos alvos terapêuticos valiosos para o tratamento, diagnóstico e prognóstico do câncer de ovário. | |
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