Desenvolvimento de linhagem de T. cruzi com expressão induzível de Cas9: uma ferramenta para edição genética

• Processo: 16/21283-9
• Modalidade de apoio: Bolsas no Exterior - Pesquisa
• Data de Início da vigência: 01 de maio de 2017
• Data de Término da vigência: 31 de outubro de 2017
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Parasitologia - Protozoologia de Parasitos
• Pesquisador responsável: Simone Guedes Calderano
• Beneficiário: Simone Guedes Calderano
• Pesquisador Anfitrião: John Morrison Kelly
• Instituição Sede: Instituto Butantan. Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
• Instituição Anfitriã: London School of Hygiene and Tropical Medicine, Inglaterra
• Assunto(s): Trypanosoma cruzi Biologia molecular
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Cas9 | Crispr | genome editing | protein tag | pTcINDEX | Trypanosoma cruzi | Biologia Molecular

Resumo

A tecnologia CRISPR/Cas9 tem sido amplamente utilizada como uma ferramenta muito eficiente e versátil para manipulação genética e é uma técnica muito promissora a ser utilizada em estudos de T. cruzi. A obtenção de anticorpos específicos é demorada e nem sempre bem sucedida, assim a adição de tag em genes específicos no seu locus gênico facilitaria a caracterização de diversas proteínas neste parasito. Até agora, o sistema CRISPR/Cas9 foi utilizado em T. cruzi para knockdown de alguns genes onde a enzima Cas9 foi expressa constitutivamente. Entretanto, a atividade de Cas9 pode interferir em alguns estudos, como no reparo e replicação de DNA por exemplo. Desta forma proponho gerar uma linhagem celular que é capaz de expressar a enzima Cas9 sob a indução por tetraciclina por meio do vetor de expressão pTcINDEX. Esta linhagem Cas9-induzivel seria capaz de expressar altos níveis desta enzima por um período suficiente para permitir a edição gênica, porém ausente logo em seguida. Tal tecnologia disponível no laboratório seria uma ferramenta muito valiosa para nossos estudos futuros. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

COSTA, FERNANDA CRISTINA; FRANCISCO, AMANDA FORTES; JAYAWARDHANA, SHIROMANI; CALDERANO, SIMONE GUEDES; LEWIS, MICHAEL D.; OLMO, FRANCISCO; BENEKE, TOM; GLUENZ, EVA; SUNTER, JACK; DEAN, SAMUEL; et al. Expanding the toolbox for Trypanosoma cruzi: A parasite line incorporating a bioluminescence-fluorescence dual reporter and streamlined CRISPR/Cas9 functionality for rapid in vivo localisation and phenotyping. PLoS Neglected Tropical Diseases, v. 12, n. 4, APR 2018. (16/21283-9, 13/07600-3, 16/08958-7)