| Processo: | 16/21116-5 |
| Modalidade de apoio: | Bolsas no Exterior - Estágio de Pesquisa - Doutorado |
| Data de Início da vigência: | 01 de abril de 2017 |
| Data de Término da vigência: | 31 de março de 2018 |
| Área de conhecimento: | Ciências da Saúde - Odontologia - Cirurgia Buco-maxilo-facial |
| Pesquisador responsável: | Márcio Mateus Beloti |
| Beneficiário: | Helena Bacha Lopes |
| Supervisor: | Janet L Stein |
| Instituição Sede: | Faculdade de Odontologia de Ribeirão Preto (FORP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil |
| Instituição Anfitriã: | University of Vermont (UVM), Estados Unidos |
| Vinculado à bolsa: | 14/08443-1 - Participação de integrinas na diferenciação osteoblástica de células-tronco mesenquimais induzida por superfícies de titânio com micro e nanotopografia, BP.DR |
| Assunto(s): | Integrinas Próteses e implantes Nanotopografia Titânio CRISPR-Cas9 Osteoblastos |
| Palavra(s)-Chave do Pesquisador: | CRISPR-Cas9 | Implante | integrinas | nanotopografia | osteoblastos | titânio | Cirurgia e Traumatologia Buco-Maxilo-Faciais |
Resumo Interações entre células e titânio (Ti) são cruciais para a osseointegração de implantes dentários. As integrinas medeiam a adesão de células às proteínas da matriz extracelular e alguns dos seus membros estão envolvidos no processo de diferenciação osteoblástica. Os resultados do projeto intitulado " Papel das integrinas na diferenciação osteoblástica de células-tronco mesenquimais induzidas por titânio com micro e nanotopografia" têm mostrado que o Ti com nanotopografia (Ti-Nano) e o Ti com microtopografia (Ti-Micro) modulam a expressão de vários genes envolvidos na via de sinalização das integrinas comparado ao Ti usinado (Ti-Usinado), com efeito mais pronunciado sobre o Ti-Nano. As integrinas beta 3, alfa 10 e alfa V estão entre as reguladas pelo Ti-Nano. Então, o objetivo desse estudo é investigar, através do silenciamento gênico por agrupados de curtas repetições palindrômicas regularmente interespaçadas / associados à nuclease 9 (clustered regularly interspaced short palindromic repeats / associated nuclease 9) (CRISPR-Cas9), o papel dessas integrinas na diferenciação osteoblástica induzida pelas superfícies de Ti. Para isso, células-tronco mesenquimais de ratos serão transduzidas com CRISPR-Cas9 e a eficiência de silenciamento será avaliada por PCR em tempo real e Western blot. As células transduzidas serão cultivadas sobre os discos de Ti com as três diferentes superfícies, Ti-Nano, Ti-Micro e Ti-Usinado e os seguintes parâmetros serão avaliados: (1) expressão gênica da integrina beta 3, integrina alfa 10 e integrina alfa V e dos marcadores osteoblásticos RUNX2, osterix, sialoproteína óssea e fosfatase alcalina (ALP), por PCR em tempo real aos 3 dias, (2) expressão proteica da integrina beta 3, integrina alfa 10 e integrina alfa V e RUNX2, por Western blot aos 3 dias, e (3) atividade de ALP, por Fast Red aos 10 dias. Os dados quantitativos serão obtidos em triplicata (n=3) e analisados pelo teste ANOVA One-Way com nível de significância de 5%. | |
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