Caracterização estrutural da proteína NS2 do vírus sincicial respiratório humano e estudo da interação com flavonóides: busca de moléculas candidatas para o desenho de antivirais

• Processo: 17/00737-4
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2017
• Data de Término da vigência: 28 de fevereiro de 2018
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Microbiologia - Microbiologia Aplicada
• Pesquisador responsável: Fátima Pereira de Souza
• Beneficiário: Jéssica Maróstica de Sá
• Instituição Sede: Instituto de Biociências, Letras e Ciências Exatas (IBILCE). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de São José do Rio Preto. São José do Rio Preto , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 16/17378-4 - Caracterização estrutural da proteína NS2 do Vírus Sincicial Respiratório Humano e estudo da interação com flavonóides: busca de moléculas candidatas para o desenho de antivirais, AP.R
• Assunto(s): Flavonoides Virologia Ressonância magnética nuclear Vírus sincicial respiratório humano Elementos estruturais de proteínas Antivirais
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Estutura | flavonóides | Ns2 | Rmn | virologia

Resumo

O Vírus Sincicial Respiratório Humano (hRSV) é o principal agente causador de doenças respiratórias agudas severas (ARI- Acute Respiratory Infections) como pneumonia e bronquiolite. Trata-se de um vírus da família Paramyxoviridae, com simetria helicoidal e envelope lipídico. Possui um genoma de RNA fita simples, não segmentado, com 10 genes codificantes. Um dos fatores que contribuem para o sucesso na replicação viral é a evasão do sistema imunológico pelo vírus, processo dirigido pelas proteínas NS1 e NS2. Tais proteínas podem atuar inibindo ou neutralizando várias etapas da via dos interferons, bem como agir de forma a auxiliar o silenciamento do complexo ribonucleoprotéico (RNP) do RSV. Até o momento a proteína NS2 do hRSV não tem sua estrutura tridimensional resolvida, e também é uma proteína que não apresenta homologia conhecida. Deste modo, conhecer a estrutura e buscar ligantes promissores que possam interagir com a mesma e bloquear sua atuação é uma via para busca de potenciais antivirais e um candidato para prevenir as interações de NS2 com as demais proteínas, impedindo, deste modo, o sucesso da replicação viral. Este projeto tem como objetivo resolver a estrutura tridimensional desta proteína por ressonância magnética nuclear, investigar a interação da NS2 com os flavonóides Quercetina e Morina por espectroscopia de fluorescência e verificar as características físico-químicas de interação desta proteína com estes ligantes. Para alcançar estes objetivos serão realizadas a clonagem, expressão e purificação da proteína NS2 do hRSV e, em seguida, determinação de sua estrutura tridimensional e verificação do processo de interação. O gene NS2 será clonado em vetor pJEXpress401-T5 e expresso em bactéria Escherichia coli da linhagem Gold DE3. A proteína expressa será purificada em cromatografia de afinidade. Os resultados do presente estudo propiciarão conhecer a estrutura da proteína, identificar o sítio de interação com a quercetina e a morina, além da estabilidade da proteína, possibilitando obter um modelo de interação bem como propor modelos terapêuticos. (AU)