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Estudos cristalográficos da TbG6PDH e de mutantes da TcG6PDH e complexos com inibidores

Processo: 17/00674-2
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
Vigência (Início): 01 de março de 2017
Vigência (Término): 31 de maio de 2018
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica - Enzimologia
Pesquisador responsável:Artur Torres Cordeiro
Beneficiário:Amanda Gonçalves Eufrásio
Instituição-sede: Centro Nacional de Pesquisa em Energia e Materiais (CNPEM). Ministério da Ciência, Tecnologia, Inovações e Comunicações (Brasil). Campinas , SP, Brasil
Vinculado ao auxílio:16/14271-4 - Aperfeiçoamento dos inibidores da enzima G6PDH para desenvolvimento de fármacos contra Chagas, AP.R
Assunto(s):Cristalografia   Desenvolvimento de fármacos   Inibidores enzimáticos   NADP   Mutagênese sítio-dirigida

Resumo

A enzima glicose-6-fosfato desidrogenase de Tripanosoma cruzi (TcG6PDH) catalisa o primeiro passo da via de pentose realizando a oxidação de glicose-6-fosfato (G6P) a 6-fosfoglucolactona mediante a redução de NADP+ a NADPH. A TcG6PDH tem sido estudada por nosso grupo como um dos alvos moleculares para o desenvolvimento de fármacos contra a doença de Chagas. O presente projeto irá avançar com a caracterização dos novos inibidores descobertos por ensaios de High Throughput Screening (HTS) (Mercali G. et al. J. Biomol. Screen, 2014, 19(10):1362-71) através da realização de experimentos de soaking em cristais da TcG6PDH, com o propósito de identificar o sítio de ligação pela determinação da estrutura cristalográfica de um complexo enzima-inibidor. Outra alternativa que será explorada para a obtenção do complexo G6PDH-inibidor consiste em usar a enzima homóloga de T. brucei (TbG6PDH) nos ensaios de cristalização e soaking. A TbG6PDH, tem 70% de identidade sequencial com a TcG6PDH e também é fortemente inibida pelas mesmo hits identificados contra a TcG6PDH. Usaremos uma construção com deleções no N e C terminal, similar à que foi estabelecida para cristalizar a TcG6PDH (Tc”G6PDH = D58-T545). Outro ponto que será investigado neste projeto é a validação da existência de uma cavidade adjacente ao sítio de ligação de NADP com potencial para o desenho racional de fármacos por mutagênese sítio-dirigida e síntese de inibidores específicos. (AU)