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Edição gênica da levedura modelo Pichia pastoris pelo sistema CRISPR-Cas e transformação da enzima oxidase alternativa do fungo Ceratocystis cacaofunesta, causador do mal do facão no cacaueiro

Processo: 16/24264-5
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
Vigência (Início): 01 de abril de 2017
Vigência (Término): 31 de março de 2018
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Genética - Genética Molecular e de Microorganismos
Pesquisador responsável:Gonçalo Amarante Guimarães Pereira
Beneficiário:Laura Beatrice Poll
Instituição-sede: Instituto de Biologia (IB). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
Assunto(s):Ceratocystis cacaofunesta   Oxidase alternativa   Cacau   Theobroma cacao   Pichia pastoris   Manipulação genética   Fungicidas

Resumo

O cacaueiro (Theobroma cacao) é uma cultura de grande relevância econômica para o Brasil, pois fornece a matéria-prima utilizadas principalmente para a produção do chocolate, produto mundialmente apreciado, e cuja demanda cresce anualmente. Porém, uma das maiores causas de perdas na sua produção são doenças de origem fúngica, as quais ainda não são controladas de forma eficaz. Um dos patógenos de maior relevância no Brasil é o fungo ascomiceto Ceratocystis cacaofunesta, agente etiológico do Mal do Facão. A partir de um programa de pesquisa dedicado ao tema, nosso grupo identificou que a enzima mitocondrial Oxidase Alternativa (AOX) desse fungo pode desempenhar um importante papel para a sua sobrevivência e virulência, configurando-se como um alvo molecular de grande interesse para o controle desta e de outras doenças importantes para o Brasil. Em parceria com especialistas nas áreas de biologia estrutural e química biológica, dezenas de novas moléculas candidatas a inibidoras da AOX foram planejadas e sintetizadas, as quais se apresentaram promissoras em sistema e levedura. Entretanto, se faz necessário testar a atividade destas moléculas sobre a AOX de C. cacaofunesta (CcAOX), a fim de se avaliar a potencial eficácia de um fungicida baseado nestas moléculas. Assim sendo, este projeto tem por objetivo manipular geneticamente a P. pastoris, levando ao nocaute da sua AOX endógena e transformando a CcAOX em seu lugar. Com isso, seriam aproveitadas as metodologias já estabelecidas para a triagem e caracterização de inibidores da AOX, gerando-se um novo modelo experimental útil para o desenvolvimento de um defensivo agrícola eficaz. (AU)

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