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Padronização e validação de ensaio imunoenzimático para quantificação do hormônio luteinizante para a espécie bovina

Processo: 17/02193-1
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
Vigência (Início): 01 de abril de 2017
Vigência (Término): 31 de março de 2018
Área do conhecimento:Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
Pesquisador responsável:Guilherme de Paula Nogueira
Beneficiário:Francine Rodrigues Navarro
Instituição-sede: Faculdade de Medicina Veterinária (FMVA). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Araçatuba. Araçatuba , SP, Brasil
Assunto(s):Biotinilação   Glicoproteínas   Ensaio de imunoadsorção enzimática   Hormônio luteinizante

Resumo

Em virtude da reconhecida participação do hormônio luteinizante (LH) nos processos reprodutivos, diferentes metodologias vêm sendo desenvolvidas para quantificar essa gonadotrofina. O objetivo do presente estudo é padronizar e validar um ensaio imunoenzimático (ELISA) para a quantificação do LH bovino, por meio, do sistema de amplificação biotina-estreptavidina peroxidase em um ensaio competitivo. Para isso serão realizados testes de ligação para avaliar a melhor combinação entre a concentração do anticorpo específico, anticorpo de captura e b-LH biotinilado que resultem em densidade óptica próxima a 1,0. Após essa triagem serão iniciados os testes apenas com a curva padrão, a fim de estabelecer o melhor diluente para elaboração das soluções padrão, os tempos de incubação, a temperatura e as lavagens entre cada etapa. Posteriormente, a metodologia será aplicada em amostras de plasma coletadas de bovinos em diferentes estágios de desenvolvimento (bezerras, novilhas e vacas) e as concentrações de b-LH resultantes do método em desenvolvimento serão comparadas com as obtidas por radioimunoensaio (RIA). Por fim, o método será submetido à procedimentos de validação como exatidão, precisão, sensibilidade, limite de quantificação inferior e linearidade, sendo estes testes realizados em quadruplicata em 8 ensaios independentes. O programa a ser utilizado para realização dos cálculos de regressão linear e não linear das curvas padrão e as correlações entre as doses obtidas por ELISA e RIA serão efetuados no GraphPad Prism, versão 6.0 para Windows. (AU)

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