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Potencial de utilização de células pós-editadas no gene TFAM pela tecnologia CRISPR CAS 9 em modelo bovino

Processo: 17/08896-4
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
Vigência (Início): 01 de dezembro de 2017
Vigência (Término): 30 de abril de 2020
Área do conhecimento:Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
Pesquisador responsável:Carlos Eduardo Ambrósio
Beneficiário:Vanessa Cristina Oliveira Nogueira de Pontes
Instituição-sede: Faculdade de Zootecnia e Engenharia de Alimentos (FZEA). Universidade de São Paulo (USP). Pirassununga , SP, Brasil
Bolsa(s) vinculada(s):19/04442-4 - Knock-in do gene TFAM humano em fibroblastos bovinos pela tecnologia CRISPR/Cas9, BE.EP.PD
Assunto(s):Fibroblastos   Bovinos   Genes

Resumo

O fator de transcrição A mitocondrial (TFAM) é um membro da subfamília HMGB que se liga a promotores do DNA mitocondrial (mtDNA). É um gene importante para a manutenção do mtDNA, pois regula o número de cópias e é essencial para inicialização da replicação e transcrição do mtDNA. Recentemente técnicas de edição gênica vêm sendo utilizada como uma ferramenta bastante eficaz na manipulação genômica. A nova tecnologia chamada de CRISPR/ Cas9 (regulary interspaced clustered short palindromic repeats) utiliza um RNA guia (gRNA) curto que contém 20 nucleotídeos complementares a sequência de DNA. Quando o RNA guia se liga ao local alvo, a proteína Cas9 é recrutada para se ligar no local alvo e induzir a dupla quebra na cadeia de DNA. Neste contexto, editamos o gene TFAM em fibroblastos bovinos pela tecnologia CRISPR Cas9, justamente por este gene regular a especificidade de replicação do mtDNA, consequentemente visando gerar uma célula depletada quanto à replicação mitocondrial. Desta forma, esta proposta tem como objetivo analisar a capacidade de manutenção das células pós- editadas em cultura e sua funcionalidade, ou seja, a caracterização da quantidade de número de cópias mitocondriais, análise do potencial de membrana e viabilidade de manutenção do cultivo in vitro. A presente proposta permitirá a expansão de pesquisas ainda carentes de estudos mais profundos, permitindo a confirmação da geração de um novo modelo de estudo de herança e segregação mitocondrial.

Publicações científicas
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
DE OLIVEIRA, VANESSA CRISTINA; ALVES MOREIRA, GABRIEL SASSARAO; BRESSAN, FABIANA FERNANDES; MARIANO JUNIOR, CLESIO GOMES; SANTOS ROBALLO, KELLY CRISTINE; CHARPENTIER, MARINE; CONCORDET, JEAN-PAUL; MEIRELLES, FLAVIO VIEIRA; AMBROSIO, CARLOS EDUARDO. Edition of TFAM gene by CRISPR/Cas9 technology in bovine model. PLoS One, v. 14, n. 3 MAR 7 2019. Citações Web of Science: 0.

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