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Mecanismos envolvidos na geração de rearranjos cromossômicos e aneuploidia em Trypanosoma cruzi expostos à radiação ionizante

Processo: 17/23312-9
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Doutorado Direto
Vigência (Início): 01 de dezembro de 2017
Vigência (Término): 31 de julho de 2021
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Parasitologia - Protozoologia de Parasitos
Pesquisador responsável:José Franco da Silveira Filho
Beneficiário:Fernanda Sycko Uliana Marchiano
Instituição-sede: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil
Vinculado ao auxílio:16/15000-4 - Trypanosoma cruzi: variabilidade genômica intra- e interespecífica e mecanismos de invasão/evasão celular, AP.TEM
Assunto(s):Trypanosoma cruzi   Biologia molecular   Aneuploidia   Radiação ionizante   Rearranjo gênico   Hibridização genômica comparativa   Modelos animais

Resumo

A indução de DSB (Double Strand Break) na dupla fita do DNA por meio de radiação ionizante é uma ferramenta útil em estudos de recombinação genética em eucariotos. Mecanismos de reparo por DSB contribuem para a plasticidade genômica e podem ter papel importante no polimorfismo e rearranjos cromossômicos em fungos e protozoários. O nosso objetivo é estudar o reparo de DSB induzida por radiação ionizante em T. cruzi e o seu papel na geração da diversidade genética observada nas diferentes linhagens e cepas do parasita. Além disso, investigaremos os efeitos da radiação ionizante na virulência de T. cruzi em camundongos. Para alcançar estes objetivos desenvolveremos as seguintes metas: 1) analisar os efeitos da radiação ionizante sobre o cariótipo molecular e sintenia gênica em T. cruzi (clone CL Brener). No projeto serão selecionados clones obtidos pela irradiação do parasita com diferentes doses (100, 250 e 500 Gy) de radiação ionizante gama. Alterações do cariótipo que envolvem regiões cromossômicas e100 kb (macro alterações) serão identificadas pela hibridização das bandas cromossômicas separadas por eletroforese de campo pulsado (PFGE) com marcadores cromossomo-específicos; 2) identificar alterações cromossômicas induzidas por radiação ionizante por hibridização genômica comparativa baseada em microarranjos de DNA (aCGH). A técnica de aCGH) será usada para detecção e mapeamento global de alterações genômicas. Clones que apresentarem rearranjos cromossômicos serão examinados quanto a ploidia (monossomia e polissomia) cromossômica; 3) avaliar a virulência dos clones irradiados de CL Brener em camundongos. A virulência dos clones irradiados que apresentarem rearranjos cromossômicos será investigada pela infecção em camundongos. Desta maneira pretendemos obter novas informações sobre a geração da diversidade genética observada nas diferentes linhagens e cepas do parasita. (AU)