Análise proteômica comparativa entre Xanthomonas citri subsp. citri selvagem e seu mutante de deleção treA e a interação in vitro dos respectivos proteomas com a trealase recombinante

• Processo: 17/23196-9
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de fevereiro de 2018
• Data de Término da vigência: 31 de janeiro de 2019
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Microbiologia - Microbiologia Aplicada
• Pesquisador responsável: Maria Teresa Marques Novo Mansur
• Beneficiário: Solange Cristina Antão
• Instituição Sede: Centro de Ciências Biológicas e da Saúde (CCBS). Universidade Federal de São Carlos (UFSCAR). São Carlos , SP, Brasil
• Assunto(s): Virulência Proteômica Cancro (doença de planta) Trealase Xanthomonas citri
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Cancro cítrico | proteômica | Trealase | Xanthomonas | Proteômica

Resumo

O cancro cítrico proporciona queda na produtividade e na qualidade das frutas cítricaspela falta de medidas de controle e erradicação que sejam eficientes. É causado pela bactériaXanthomonas citri subsp citri (Xcc), de rápida dispersão e alto grau de virulência. Em umtrabalho previamente realizado em nosso laboratório, foi produzido um mutante de Xcc peladeleção do gene treA, presente em cópia única no genoma de Xcc linhagem 306 e quecodifica a enzima trealase. Essa enzima catalisa a hidrólise do dissacarídeo trealose em doismonômeros de glicose. Há trabalhos que relacionam a atuação da trealose com mecanismosde proteção da bactéria, e nesse sentido, a deleção do gene treA levou a uma maior virulênciada Xcc. O objetivo deste trabalho será comparar o proteoma da linhagem selvagem com o dalinhagem mutante (Xcc”treA) para uma melhor compreensão do papel da trealase noprocesso infecioso de Xcc, uma vez que a identificação de outras proteínas afetadas peladeleção gênica poderá evidenciar possíveis vias de interação da mesma. Curvas decrescimento das duas linhagens serão realizadas em meio indutor de patogenicidade XAM-Mpara determinar a fase logarítmica do crescimento bacteriano, momento em que será realizadaa coleta de células para a análise proteômica diferencial. As proteínas totais serão extraídas,quantificadas e utilizadas em ensaios de eletroforese bidimensional em gel de poliacrilamida(2D-PAGE e/ou 2D-DIGE). Spots identificados como sendo diferenciais entre as duaslinhagens serão excisados, digeridos com tripsina e submetidos à identificação porespectrometria de massas. Será também realizado um ensaio de Pull Down para investigaçãode possíveis interações da trealase de Xcc, produzida na forma recombinante em nosso grupode pesquisa, com demais proteínas de Xcc in vitro. Os resultados poderão dar indícios dosmecanismos envolvidos no metabolismo de trealose e sua relação com a patogenicidade emXcc.