Análise de técnicas metodológicas para otimização de estudos de bioluminescência in vitro

• Processo: 17/16981-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de janeiro de 2018
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2018
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Humana e Médica
• Pesquisador responsável: Nelson Gaspar Dip Júnior
• Beneficiário: Luis Felipe Gastaldo Poletti
• Instituição Sede: Hospital do Servidor Público Municipal (HSPM). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Urologia Bioluminescência Puromicina Transfecção Células tumorais Linhagem celular tumoral
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: bioluminescência metodologia Padronização tecnicas | Urologia

Resumo

Bioluminescência é a capacidade de certos organismos de gerar luz própria a partir de reações enzimáticas especificas. Os estudos utilizando o processo de bioluminescência configuraram um grande marco na ciência, uma vez que a técnica possibilitou visualizar processos metabólicos intracelulares de modo prático e de fácil reprodução. Sua aplicação permitiu a análise de processos celulares como investigações do câncer, incluindo vias moleculares de carcinogênese, respostas a tratamentos e terapias de alvo molecular, tornando-se uma ferramenta importante no estudo pré-clinico de novos fármacos. Entretanto, ainda há padronizações a serem realizadas no que concerne a sua metodologia, afim de aprimorar a técnica e por conseguinte aumentar sua eficácia. Dentre os fatores limitantes de técnica o presente estudo visa investigar os processos de seleção de culturas estáveis, afim de equilibrar os efeitos desejáveis dos indesejáveis. Sendo assim investigaremos as seguintes variáveis observadas como limitantes: Avaliar o impacto de diferentes concentrações de Puromicina sobre a viabilidade celular das células da linhagem tumoral 5637 de carcinoma urotelial de bexiga humano, a fim de se definir a concentração antibiótica ideal para seleção celular. Estudar o papel de três tipos de reagentes lipídicos na transfecção do vetor plasmidial de bioluminescência em células 5637 de carcinoma urotelial de bexiga humano, na tentativa de se estabelecer um método padrão de transfecção de plasmídeo. (AU)