Análise da função do gene ssa_0094 na formação de biofilme por Streptococcus sanguinis

• Processo: 17/23183-4
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de fevereiro de 2018
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2021
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Odontologia
• Pesquisador responsável: Renata de Oliveira Mattos Graner
• Beneficiário: Isabela Camargo
• Instituição Sede: Faculdade de Odontologia de Piracicaba (FOP). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Piracicaba , SP, Brasil
• Assunto(s): Biofilmes Streptococcus sanguinis Hidrolases Virulência Eritromicina Mutação
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: biofilme | Genética recombinante | Hidrolase de mureína | mecanismos de virulência | Microorganismos bucais | Streptococcus sanguinis | Microbiologia e Imunologia

Resumo

Streptococcus sanguinis é uma das principais espécies comensais que inicia a colonização dos dentes e é capaz de inibir espécies cariogênicas como Streptococcus mutans. Os mecanismos moleculares envolvidos na formação de biofilmes por S. sanguinis são pouco compreendidos. Um dos principais componentes da matriz extracelular de biofilmes formados por S. sanguinis é o DNA genômico extracelular (DNAe). Há evidências de que S. sanguinis produz DNAe sem sofrer autólise e durante a divisão celular, através de um processo rigorosamente controlado por hidrolases de peptideoglicano. Nosso grupo demonstrou que a produção de DNAe é induzida pelo sistema regulador de dois componentes VicRK. Identificamos ainda que VicRK induz a expressão de diversos genes não caracterizados, os quais codificam prováveis hidrolases de peptideoglicano. Estes incluem ssa_0094, o qual tem expressão significativamente aumentada durante a formação de biofilmes. O objetivo deste projeto é investigar o papel de ssa_0094 na formação de biofilmes dependente da produção de DNAe em S. sanguinis. Para isto, ssa_0094 será inativado na cepa S. sanguinis de referência SK36, através de recombinação homóloga com alelo mutado, no qual ssa_0094 será substituído por gene de resistência à eritromicina. A mutante isogênica será comparada com a cepa parental quanto ao crescimento planctônico em meio BHI, formação de biofilmes em placas de poliestireno e produção de DNAe, o qual será quantificado em sobrenadantes de cultura através de PCR quantitativo com primers para o gene 16SrRNA. A mutante complementada com cópia epissomal de ssa_0094 também será utilizada como controle. Nossa hipótese de trabalho é que a inativação de ssa_0094 comprometerá a produção de DNAe e consequentemente, a formação de biofilmes em SK36. Portanto, os resultados deste projeto deverão contribuir para identificação de funções requeridas para a liberação de DNA genômico e formação de biofilmes em S. sanguinis. (AU)