Expressão heteróloga de uma protease coagulante produzida por Thrmomucor indicae-seudaticae N-31 em Escherichia coli e em Pichia Pastoris

• Processo: 17/14629-9
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2018
• Data de Término da vigência: 28 de fevereiro de 2019
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Microbiologia - Microbiologia Aplicada
• Acordo de Cooperação: Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
• Pesquisador responsável: Roberto da Silva
• Beneficiário: Waldir Eduardo Simioni Pereira
• Instituição Sede: Instituto de Biociências, Letras e Ciências Exatas (IBILCE). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de São José do Rio Preto. São José do Rio Preto , SP, Brasil
• Assunto(s): Clonagem DNA recombinante
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: clonagem molecular | Coagulante de leite | dna recombinante | enzima proteolítica | Bioquímica de Microrganismos

Resumo

Os principais coagulantes enzimáticos substituintes do coalho convencional, utilizados na indústria de produtos lácteos, são as proteases. Essas enzimas atuam na atividade proteolítica, clivando ligações peptídicas em proteínas e peptídeos. As proteases aspárticas (EC 3.4.23) são enzimas que possuem a função de hidrolisar especificamente a ligação peptídica da º-caseína entre os aminoácidos Phe105-Met106 liberando para-º-caseína e glicomacropeptídeo, que promove a desestabilização de micelas de caseína, resultando na coagulação do leite. A substituição do coalho tradicional por coagulantes enzimáticos é extremamente necessária, visando à redução do abate de animais para esses fins. Mesmo sendo produzidas por uma gama de microrganismos, ainda há restrições que dificultam o processo de obtenção destes biocatalizadores. Para minimizar tais dificuldades, a utilização de ferramentas de Biologia Molecular representa uma eficiente estratégia para melhorar a produção enzimática. A clonagem e a expressão de genes codificadores de proteases em bactérias e leveduras tornam-se uma alternativa interessante para a utilização das enzimas em bioprocessos consolidados para a produção de queijos. Desta forma, Escherichia coli e Pichia pastoris configuram-se como sistemas viáveis para expressão heteróloga. Levando em consideração a necessidade de um substituinte ao coalho convencional e sua produção em quantidades significativas, o objetivo deste trabalho será clonar e expressar uma protease produzida por Thermomucor indicae-seudaticae N31 em E. coli e P. pastoris, bem como a caracterização bioquímica dessa enzima. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

PEREIRA, WALDIR EDUARDO SIMIONI; DA SILVA, RONIVALDO RODRIGUES; DE AMO, GABRIELA SALVADOR; RULLER, ROBERTO; KISHI, LUCIANO TAKESHI; BOSCOLO, MAURICIO; GOMES, ELENI; DA SILVA, ROBERTO. A Collagenolytic Aspartic Protease from Thermomucor indicae-seudaticae Expressed in Escherichia coli and Pichia pastoris. Applied Biochemistry and Biotechnology, v. 191, n. 3, FEB 2020. (17/14629-9)

Publicações acadêmicas

(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)

PEREIRA, Waldir Eduardo Simioni. Expressão heteróloga de uma protease coagulante produzida por Thermomucor indicae-seudaticae N31 em Escherichia coli e Pichia pastoris. 2019. Dissertação de Mestrado - Universidade Estadual Paulista (Unesp). Instituto de Biociências Letras e Ciências Exatas. São José do Rio Preto São José do Rio Preto.