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Identificação de substâncias bioativas produzidas por Lactobacillus paracasei 28.4 para o controle da candidose bucal

Processo: 17/19219-3
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
Vigência (Início): 01 de abril de 2018
Vigência (Término): 31 de julho de 2020
Área do conhecimento:Ciências da Saúde - Odontologia
Pesquisador responsável:Juliana Campos Junqueira
Beneficiário:Rodnei Dennis Rossoni
Instituição-sede: Instituto de Ciência e Tecnologia (ICT). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de São José dos Campos. São José dos Campos , SP, Brasil
Bolsa(s) vinculada(s):18/21239-5 - Galleria mellonella na descoberta de drogas antimicrobianas: substâncias bioativas extraídas de probiótico contra células persistentes de Candida Albicans, BE.EP.PD
Assunto(s):Galleria mellonella   Lactobacillus paracasei   Microbiologia oral   Candida albicans   Citocinas

Resumo

Atualmente, as opções de tratamento para as infecções fúngicas, como a candidose bucal, apresentam limitações devido à baixa disponibilidade de drogas antifúngicas e ao surgimento de cepas resistentes aos medicamentos. O uso de probióticos é considerado promissor por possuírem atividade antimicrobiana bem como ação imunomoduladora, porém sua aplicação clínica em pacientes imunocomprometidos é crítica devido a possibilidade de bacteriemia causada pelas bactérias do gênero Lactobacillus. Nesse contexto, a identificação de substâncias bioativas produzidas por Lactobacillus para o controle da candidose bucal torna-se inovador e seguro para pacientes hospitalizados e imunocomprometidos. Sendo assim, o objetivo desse estudo será extrair e fracionar as substâncias bioativas produzidas por L. paracasei 28.4 e avaliar seus efeitos in vitro sobre a virulência de C. albicans e sua resposta antimicrobiana e imunológica em modelos de estudo in vivo. As substâncias bioativas do sobrenadante da cultura de L. paracasei 28.4 serão extraídas com acetato de etila e posteriormente fracionadas e identificadas por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência com Detector de Arranjo de Diodo (CLAE-DAD). Inicialmente, o extrato bruto e todas as frações obtidas do sobrenadante serão avaliados quanto a citotoxicidade em cultura de células de fibroblastos gengivais humanos (FMM-1), macrófagos de camundongo (RAW 264.7) e queratinócitos de pele humana (HaCaT). A seguir, o extrato bruto e as frações do sobrenadante de L. paracasei 28.4 serão testados em 30 cepas clínicas de C. albicans, isoladas da cavidade bucal de pacientes portadores do Vírus da Imunodeficiência Humana (HIV) por meio do teste de Concentração Inibitória Mínima (CIM). O efeito antifúngico do extrato bruto e as frações das substâncias bioativas de L. paracasei 28.4 será verificado em 3 cepas resistentes ao fluconazol através dos ensaios in vitro de formação de biofilme e filamentação. Ainda in vitro, será investigada a ação imunomoduladora do extrato bruto e das frações isoladas das substâncias bioativas de L. paracasei 28.4, utilizando células RAW 264.7 ativadas por Candida para quantificação de citocinas por meio de microesferas marcadas com fluorescência. A seguir, os efeitos profiláticos e terapêuticos do extrato bruto e das frações isoladas das substâncias bioativas de L. paracasei 28.4 serão investigados no modelo experimental de Galleria mellonella através da análise da curva de sobrevivência, contagem de hemócitos, caracterização celular dos hemócitos por citometria de fluxo, contagem de C. albicans do corpo gorduroso e expressão de genes relacionados aos peptídeos antimicrobianos (galiomicina, galleriomicina, cepropina D), a fagocitose (C8- Contig 1910) e a regulação de citocinas e da cascata NF-kB (C7 Contig 15362) presentes na resposta imune desse modelo de invertebrado. Diante disso, a fração isolada das substâncias produzidas por L. paracasei 28.4 com melhor efeito antifúngico e imunomodulatório observado nos testes anteriores, será selecionada com o propósito de expandir e comprovar tais efeitos no modelo experimental de candidose bucal induzida em camundongos imunossuprimidos. Essa fração de substâncias bioativas será aplicada diretamente sobre lesões de candidose induzidas no dorso da língua dos animais. O desenvolvimento da candidose bucal será monitorado por meio de recuperação de C. albicans da cavidade bucal dos animais, avaliação macroscópica, análise histológica e expressão de gênica de beta-defensinas 1 e 3. Os resultados serão submetidos a uma análise exploratória para a seleção do teste estatístico mais adequado para cada experimento desse estudo. O nível de significância considerado de cada teste será de 5%.

Publicações científicas (4)
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
DE BARROS, PATRICIA PIMENTEL; ROSSONI, RODNEI DENNIS; RIBEIRO, FELIPE DE CAMARGO; SILVA, MICHELLE PENELUPPI; DE SOUZA, CHEYENNE MARCAL; CARDOSO JORGE, ANTONIO OLAVO; JUNQUEIRA, JULIANA CAMPOS. Two sporulated Bacillus enhance immunity in Galleria mellonella protecting against Candida albicans. Microbial Pathogenesis, v. 132, p. 335-342, JUL 2019. Citações Web of Science: 0.
ROSSONI, RODNEI DENNIS; RIBEIRO, FELIPE DE CAMARGO; SANTANA DOS SANTOS, HANNA FLAVIA; DOS SANTOS, JESSICA DIANE; OLIVEIRA, NICASSIA DE SOUSA; DOS SANTOS DUTRA, MARIGNES THEOTONIO; BIAZZI DE LAPENA, SIMONE APARECIDA; JUNQUEIRA, JULIANA CAMPOS. Galleria mellonella as an experimental model to study human oral pathogens. ARCHIVES OF ORAL BIOLOGY, v. 101, p. 13-22, MAY 2019. Citações Web of Science: 1.
PEREIRA, THAIS CRISTINE; DE BARROS, PATRICIA PIMENTEL; DE OLIVEIRA FUGISAKI, LUCIANA RUANO; ROSSONI, RODNEI DENNIS; RIBEIRO, FELIPE DE CAMARGO; DE MENEZES, RAQUEL TELES; JUNQUEIRA, JULIANA CAMPOS; SCORZONI, LILIANA. Recent Advances in the Use of Galleria mellonella Model to Study Immune Responses against Human Pathogens. JOURNAL OF FUNGI, v. 4, n. 4 DEC 2018. Citações Web of Science: 8.
ROSSONI, RODNEI DENNIS; VELLOSO, MARISOL DOS SANTOS; DE BARROS, PATRICIA PIMENTEL; DE ALVARENGA, JANAINA ARAUJO; DOS SANTOS, JESSICA DIANE; CHIPOLETTI DOS SANTOS PRADO, ANA CAROLINA; RIBEIRO, FELIPE DE CAMARGO; ANBINDER, ANA LIA; JUNQUEIRA, JULIANA CAMPOS. Inhibitory effect of probiotic Lactobacillus supernatants from the oral cavity on Streptococcus mutans biofilms. Microbial Pathogenesis, v. 123, p. 361-367, OCT 2018. Citações Web of Science: 1.

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