Avaliação bioquímica, estrutural e funcional de uma fosfodiesterase da peçonha de Crotalus durissus collilineatus

• Processo: 17/03580-9
• Linha de fomento: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Vigência (Início): 01 de maio de 2018
• Vigência (Término): 30 de abril de 2021
• Área do conhecimento: Ciências da Saúde - Farmácia - Análise Toxicológica
• Pesquisador responsável: Eliane Candiani Arantes Braga
• Beneficiário: Isadora Sousa de Oliveira
• Instituição-sede: Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto (FCFRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 11/23236-4 - Toxinas animais nativas e recombinantes: análise funcional, estrutural e molecular, AP.TEM
• Bolsa(s) vinculada(s): 18/21233-7 - Análises por espectrometria de massas de uma nova fosfodiesterase da peçonha de Crotalus durissus collilineatus, BE.EP.DR
• Assunto(s): Agregação plaquetária Toxinas Venenos de origem animal Crotalus durissus Diester fosfórico hidrolases Desoxirribonucleases Ribonucleases

Resumo

As peçonhas ofídicas são constituídas por uma enorme gama de componentes capazes de induzir a diversos sintomas patológicos em vítimas do envenenamento, que faz parte das circunstâncias negligenciadas pela OMS e também é um grave problema de saúde pública no Brasil. No território nacional, o gênero Crotalus é representado pelas serpentes da espécie Crotalus durissus, dispersas em diversas regiões. Sua peçonha apresenta uma grande complexidade de componentes proteicos, podendo influenciar na toxicidade do acidente crotálico, dificultando seu tratamento. Para que o mecanismo de toxicidade dos diversos componentes seja elucidado, é necessário que os mesmos sejam isolados e caracterizados. Desta forma, sua ação no envenenamento se torna conhecida, o que facilita o tratamento de seu sintoma. Devido à complexidade da peçonha de C. d. collilineatus, muitos de seus componentes ainda não foram isolados, como é o caso da fosfodiesterase (PDE). Estas enzimas fazem parte das nucleases, juntamente a DNAse e RNAse, e apresentam elevada massa molecular (90 ~160 kDa), podendo ser encontradas em forma monomérica ou dimérica. As PDEs podem ser classificadas de 1 a 11 e são responsáveis pela quebra das ligações fosfodiéster de ácidos nucléicos, ATP, ADP, NAD, NGD, AMPc e GMPc, sendo capazes de intervir em processos fisiológicos ou patológicos, o que as tornam alvos terapêuticos de diversas patologias, além de atuarem como ferramentas moleculares. Seu papel no acidente ofídico ainda não está totalmente elucidado, mas sabe-se que a PDE é capaz de levar a hipotensão e depressão locomotora da presa e, também, é capaz de inibir a agregação plaquetária in vitro. Sendo assim, este trabalho terá como objetivos realizar o isolamento da PDE da peçonha de C. d. collilineatus, através da combinação de técnicas de cromatografia líquida, sua identificação por técnicas de espectrometria de massas e sequenciamento amino-terminal, a determinação de sua massa molecular, construir seu modelo tridimensional, avaliar sua estabilidade em diferentes condições de pH e temperatura, além de avaliar a atividade fosfodiesterásica sobre o substrato bis(p-nitrofenil)-fosfato em diferentes condições de pH e temperatura e determinar seus parâmetros cinéticos sobre o mesmo substrato, avaliar a especificidade de inibição da enzima por 5 inibidores diferentes, verificar se o soro antiofídico produzido no Brasil é capaz de reconhecer a PDE através do ensaio ELISA indireto e, por fim, realizar ensaios de agregação plaquetária com esta enzima. Desta forma, o presente estudo torna-se relevante por avaliar uma toxina que é importante para o acidente ofídico, mas até o momento pouco estudada, ampliando consideravelmente o conhecimento sobre esta classe enzimática. (AU)

Publicações científicas

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(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

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FIGUEIREDO BORDON, KARLA DE CASTRO; COLOGNA, CAMILA TAKENO; FORNARI-BALDO, ELISA CORREA; PINHEIRO-JUNIOR, ERNESTO LOPES; CERNI, FELIPE AUGUSTO; AMORIM, FERNANDA GOBBI; PINO ANJOLETTE, FERNANDO ANTONIO; CORDEIRO, FRANCIELLE ALMEIDA; WIEZEL, GISELE ADRIANO; CARDOSO, IARA AIME; et al. From Animal Poisons and Venoms to Medicines: Achievements, Challenges and Perspectives in Drug Discovery. FRONTIERS IN PHARMACOLOGY, v. 11, JUL 24 2020. (17/14035-1, 19/10173-6, 17/04724-4, 16/04761-4, 13/26619-7, 18/14158-9, 17/00586-6, 13/26200-6, 18/21233-7, 17/03580-9)

OLIVEIRA, ISADORA S.; FERREIRA, ISABELA G.; ALEXANDRE-SILVA, GABRIEL M.; CERNI, FELIPE A.; CREMONEZ, CAROLINE M.; ARANTES, ELIANE C.; ZOTTICH, UMBERTO; PUCCA, MANUELA B.. Scorpion toxins targeting Kv1.3 channels: insights into immunosuppression. Journal of Venomous Animals and Toxins including Tropical Diseases, v. 25, APR 15 2019. (17/14035-1, 17/03580-9, 18/14158-9, 18/21233-7)

MANUELA B. PUCCA; MICHELLE V. S. FRANCO; JILVANDO M. MEDEIROS; ISADORA S. OLIVEIRA; SHIRIN AHMADI; FELIPE A. CERNI; UMBERTO ZOTTICH; BRUNA K. BASSOLI; WUELTON M. MONTEIRO; ANDREAS H. LAUSTSEN. Chronic kidney failure following lancehead bite envenoming: a clinical report from the Amazon region. Journal of Venomous Animals and Toxins including Tropical Diseases, v. 26, p. -, 2020. (17/14035-1, 17/03580-9)

FERREIRA, ISABELA GOBBO; PUCCA, MANUELA BERTO; DE OLIVEIRA, ISADORA SOUSA; CERNI, FELIPE AUGUSTO; JACOB, BEATRIZ DE CASSIA DA SILVA; ARANTES, ELIANE CANDIANI. Snake venom vascular endothelial growth factors (svVEGFs): Unravelling their molecular structure, functions, and research potential. CYTOKINE & GROWTH FACTOR REVIEWS, v. 60, p. 133-143, AUG 2021. (17/03580-9)

PARENTE, JULIANA MONTENEGRO; MELLO, MARCELA MARIA BLASCKE DE; SILVA, PEDRO HENRIQUE LEITE DA; OMOTO, ANA CAROLINA MIEKO; PERNOMIAN, LAENA; OLIVEIRA, ISADORA SOUSA DE; MAHMUD, ZABED; FAZAN, JR., RUBENS; ARANTES, ELIANE CANDIANI; SCHULZ, RICHARD; et al. MMP inhibition attenuates hypertensive eccentric cardiac hypertrophy and dysfunction by preserving troponin I and dystrophin. Biochemical Pharmacology, v. 193, NOV 2021. (17/03580-9, 16/09345-9, 14/11412-0, 04/08868-0)

DE OLIVEIRA, ISADORA SOUSA; PUCCA, MANUELA BERTO; WIEZEL, GISELE ADRIANO; CARDOSO, IARA AIME; FIGUEIREDO BORDON, KARLA DE CASTRO; SARTIM, MARCO AURELIO; KALOGEROPOULOS, KONSTANTINOS; AHMADI, SHIRIN; BAIWIR, DOMINIQUE; NONATO, MARIA CRISTINA; et al. Unraveling the structure and function of CdcPDE: A novel phosphodiesterase from Crotalus durissus collilineatus snake venom. International Journal of Biological Macromolecules, v. 178, p. 180-192, MAY 1 2021. (17/00586-6, 17/03580-9, 19/10173-6, 11/23236-4, 18/21233-7)

ABREU, CAIO B.; BORDON, KARLA C. F.; CERNI, FELIPE A.; OLIVEIRA, ISADORA S.; BALENZUELA, CARLA; ALEXANDRE-SILVA, GABRIEL M.; ZOCCAL, KARINA F.; REIS, MOUZARLLEM B.; WIEZEL, GISELE A.; PEIGNEUR, STEVE; et al. Pioneering Study onRhopalurus crassicaudaScorpion Venom: Isolation and Characterization of the Major Toxin and Hyaluronidase. FRONTIERS IN IMMUNOLOGY, v. 11, AUG 20 2020. (17/00586-6, 16/04761-4, 17/04724-4, 17/03580-9, 19/10173-6, 17/14035-1, 18/21233-7)

PUCCA, MANUELA B.; KNUDSEN, CECILIE; S. OLIVEIRA, ISADORA; RIMBAULT, CHARLOTTE; A. CERNI, FELIPE; WEN, FAN HUI; SACHETT, JACQUELINE; SARTIM, MARCO A.; LAUSTSEN, ANDREAS H.; MONTEIRO, WUELTON M.. Current Knowledge on Snake Dry Bites. TOXINS, v. 12, n. 11, NOV 2020. (17/03580-9, 17/14035-1)

PUCCA, MANUELA B.; BERNARDE, PAULO SERGIO; ROCHA, ANDERSON MACIEL; VIANA, PATRIK F.; FARIAS, RAIMUNDO ERASMO SOUZA; CERNI, FELIPE A.; OLIVEIRA, ISADORA S.; FERREIRA, ISABELA G.; SANDRI, ELISEU A.; SACHETT, JACQUELINE; et al. rotalus Durissus Ruruima: Current Knowledge on Natural History, Medical Importance, and Clinical Toxinolog. FRONTIERS IN IMMUNOLOGY, v. 12, JUN 8 2021. (17/14035-1, 17/03580-9)

PUCCA, MANUELA B.; CERNI, FELIPE A.; OLIVEIRA, ISADORA S.; JENKINS, TIMOTHY P.; ARGEMI, LIDIA; SORENSEN, CHRISTOFFER V.; AHMADI, SHIRIN; BARBOSA, JOSE E.; LAUSTSEN, ANDREAS H.. Bee Updated: Current Knowledge on Bee Venom and Bee Envenoming Therapy. FRONTIERS IN IMMUNOLOGY, v. 10, SEP 6 2019. (17/14035-1, 17/04724-4, 18/14158-9, 18/21233-7, 17/03580-9)

Publicações acadêmicas

(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)

OLIVEIRA, Isadora Sousa de. Avaliação bioquímica, estrutural e funcional de uma fosfodiesterase da peçonha de Crotalus durissus collilineatus. 2021. Tese de Doutorado - Universidade de São Paulo (USP). Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto (PCARP/BC) Ribeirão Preto.