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Estudo do efeito estabilizador de diferentes solventes na estrutura da proteína verde fluorescente recombinante produzida por Escherichia coli

Processo: 18/01858-2
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
Vigência (Início): 01 de junho de 2018
Vigência (Término): 09 de agosto de 2020
Área do conhecimento:Engenharias - Engenharia Química - Tecnologia Química
Pesquisador responsável:Valéria de Carvalho Santos Ebinuma
Beneficiário:Carolina Falaschi Saponi
Instituição-sede: Faculdade de Ciências Farmacêuticas (FCFAR). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Araraquara. Araraquara , SP, Brasil
Bolsa(s) vinculada(s):18/20833-0 - Understanding the molecular interactions and stability of Green Fluorescent Protein (GFP) in ionic liquids under stress conditions, BE.EP.IC
Assunto(s):Proteínas de fluorescência verde   Líquidos iônicos   Solventes eutéticos profundos   Técnicas biossensoriais   Estabilização   Escherichia coli   Espectroscopia de fluorescência   Espectroscopia de infravermelho com transformada de Fourier

Resumo

A proteína verde fluorescente (GFP, do inglês Green Fluorescent Protein) possui fluorescência intensa e natural, sendo facilmente quantificável e tendo excelente aplicação como biossensor e biomarcador. Contudo, a manifestação de sua fluorescência é dependente da manutenção da integridade de sua estrutura proteica, a qual é muito sensível a diferentes condições de estresse, como por exemplo, temperaturas elevadas, valores extremos de pH ou presença de substâncias desnaturantes. A instabilidade da GFP em diversas condições, aliado a seu elevado custo de produção, restringe, de certo modo, o seu uso a projetos de pequena escala, no geral acadêmicos. Desse modo, o estudo de solventes que permitam proteger a estrutura da GFP em condições de estresse é essencial para permitir seu uso em larga escala. Considerando essas informações, o objetivo principal do projeto é avaliar a estabilidade da GFP recombinante produzida por Escherichia coli em diferentes solventes e sob condições de estresse, de forma a identificar compostos com capacidade de estabilizar proteínas e/ou que levem ao aumento/supressão de fluorescência (para possível aplicação no desenvolvimento de biossensores). Para tanto, serão utilizadas técnicas de análise de fluorescência (espectroscopia de fluorescência 3D e análises de intensidade de fluorescência) e, para obter conhecimentos adicionais sobre a interações solvente-proteína, dicroísmo circular e/ou reflexão total atenuada no infravermelho com transformada de fourier (ATR-FTIR) serão também utilizados. Os solventes a serem utilizados serão polímeros, solventes eutéticos profundos (DESs) e diferentes famílias de líquidos iônicos (LIs).

Publicações científicas
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
DOS SANTOS, NATHALIA VIEIRA; SAPONI, CAROLINA FALASCHI; GREAVES, TAMAR LOUISE; BRANDAO PEREIRA, JORGE FERNANDO. Revealing a new fluorescence peak of the enhanced green fluorescent protein using three-dimensional fluorescence spectroscopy. RSC ADVANCES, v. 9, n. 40, p. 22853-22858, AUG 1 2019. Citações Web of Science: 0.

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