Resumo
A proteína verde fluorescente (GFP, do inglês Green Fluorescent Protein) possui fluorescência intensa e natural, sendo facilmente quantificável e tendo excelente aplicação como biossensor e biomarcador. Contudo, a manifestação de sua fluorescência é dependente da manutenção da integridade de sua estrutura proteica, a qual é muito sensível a diferentes condições de estresse, como por exemplo, temperaturas elevadas, valores extremos de pH ou presença de substâncias desnaturantes. A instabilidade da GFP em diversas condições, aliado a seu elevado custo de produção, restringe, de certo modo, o seu uso a projetos de pequena escala, no geral acadêmicos. Desse modo, o estudo de solventes que permitam proteger a estrutura da GFP em condições de estresse é essencial para permitir seu uso em larga escala. Considerando essas informações, o objetivo principal do projeto é avaliar a estabilidade da GFP recombinante produzida por Escherichia coli em diferentes solventes e sob condições de estresse, de forma a identificar compostos com capacidade de estabilizar proteínas e/ou que levem ao aumento/supressão de fluorescência (para possível aplicação no desenvolvimento de biossensores). Para tanto, serão utilizadas técnicas de análise de fluorescência (espectroscopia de fluorescência 3D e análises de intensidade de fluorescência) e, para obter conhecimentos adicionais sobre a interações solvente-proteína, dicroísmo circular e/ou reflexão total atenuada no infravermelho com transformada de fourier (ATR-FTIR) serão também utilizados. Os solventes a serem utilizados serão polímeros, solventes eutéticos profundos (DESs) e diferentes famílias de líquidos iônicos (LIs).
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