Clonagen e caracterização de 10 transportadores da barreira hemato-encefálica humana

• Processo: 18/05328-8
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de junho de 2018
• Data de Término da vigência: 31 de maio de 2019
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Molecular e de Microorganismos
• Pesquisador responsável: Elizabeth Bilsland
• Beneficiário: Gabriel Silva Pires
• Instituição Sede: Instituto de Biologia (IB). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 15/03553-6 - Engenharia genética de leveduras para a descoberta de novos medicamentos, AP.JP
• Assunto(s): Biologia sintética Genética molecular Sistema nervoso central Clonagem Fármacos Produtos químicos Barreira hematoencefálica Saccharomyces cerevisiae
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: barreira hemato-encefálica | clonagem | fármacos | Saccharomyces cerevisiae | Transportadores | Biologia Sintética

Resumo

As drogas direcionadas ao sistema nervoso central frequentemente falham em ensaios clínicos devido ao seu mau transporte para o cérebro. Isto é devido à importação ineficiente de drogas através da barreira hemato-encefálica. Neste projeto, pretendemos usar a levedura Saccharomyces cerevisiae como uma plataforma para estudar o transporte de produtos químicos para dentro e fora das células. Para esse fim, o aluno de iniciação científica contribuirá para a criação de uma coleção de plasmídeos que codificam transportadores de membrana plasmática humana com marcação fluorescente. Estes serão transformados em estirpes de levedura, onde a via de síntese nativa de ergosterol é substituída por uma via sintética de síntese de colesterol humano. Temos resultados preliminares promissores que indicam que as cepas com colesterol nas membranas plasmáticas têm a capacidade de incorporar eficientemente proteínas trans-membranas humanas. Portanto, as cepas com uma membrana plasmática humanizada podem ser hospedeiras para a expressão heteróloga de transportadores de barreiras hematoencefálicas. Uma vez que as cepas de leveduras que expressam os transportadores humanos forem construídas, o aluno avaliará a localização subcelular de cada transportador e realizará ensaios funcionais para confirmar a especificidade do substrato para cada transportador.

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

ALMEIDA, LUDIMILA DIAS; SILVA, ALI SALIM FARAJ; MOTA, DANIEL CALIXTO; VASCONCELOS, ADRIELLE AYUMI; CAMARGO, ANTONIO PEDRO; PIRES, GABRIEL SILVA; FURLAN, MONIQUE; FREIRE, HELENA MARTINS RIBEIRO DA CUNHA; KLIPPEL, ANGELICA HOLLUNDER; SILVA, SUELEN FERNANDES; et al. Yeast Double Transporter Gene Deletion Library for Identification of Xenobiotic Carriers in Low or High Throughput. MBIO, v. 12, n. 6, NOV-DEC 2021. (17/13015-7, 19/14146-3, 17/01986-8, 18/04240-0, 18/05328-8, 18/16672-1, 15/03553-6, 19/17876-2)