Edição gênica utilizando o sistema CRISPR/Cas9 do transportador mitocondrial de nicotinamina adenina dinucleotídeo de Aspergillus fumigatus

• Processo: 18/09958-6
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de agosto de 2018
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2019
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Metabolismo e Bioenergética
• Pesquisador responsável: Sergio Akira Uyemura
• Beneficiário: Maycon Marção
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto (FCFRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Assunto(s): Bioenergética Proteína 9 associada à CRISPR Repetições palindrômicas curtas agrupadas e regularmente espaçadas Mitocôndrias Aspergillus fumigatus CRISPR-Cas9
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Aspergillus fumigatus | Cas9 | Crispr | knockdown | mitocôndria | transportador de nicotinamida adenina dinucleotideo | Bioenergética

Resumo

O Aspergillus fumigatus é um fungo saprofítico, que tem sido encontrado em todas as regiões no mundo. Acredita-se que o nicho ecológico natural é o solo, onde o mesmo sobrevive e cresce em vegetais em decomposição. Nos últimos anos, o fungo A. fumigatus deixou de ser apenas um fungo saprofítico de menor importância, para se tornar um dos principais agentes patogênicos oportunista em pacientes imunossuprimidos. Nos últimos 18 anos, nosso laboratório tem investigado o papel dos diferentes componentes mitocondriais na bioenergética e biologia desse fungo. Recentemente, identificamos e caracterizamos uma sequência que codifica o transportador mitocondrial de nicotinamida adenina dinucleotideo (Ndt1) de A. fumigatus e realizamos a expressão heteróloga em S. cerevisiae. Esta expressão recuperou duplo mutante Dndt1Dndt2 de S. cerevisiae, a qual mostrou uma recuperação do severo atraso no crescimento do duplo mutante em fontes de carbono não fermentáveis. Ainda, através do projeto 2016/23380-3 estamos implantando no laboratório a utilização da ferramenta de edição gênica CRISPR/Cas9. O acadêmico tem trabalhado na obteção um mutante que expresse constitutivamente a endonuclease Cas9, para transformá-lo apenas com o gRNA do gene de ndt1.