Elaboração de bibliotecas para o sequenciamento de alto rendimento e análises primárias dos dados

• Processo: 18/11966-7
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de agosto de 2018
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2019
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Farmácia
• Pesquisador responsável: Mario Hiroyuki Hirata
• Beneficiário: Bruna Los
• Instituição Sede: Instituto Dante Pazzanese de Cardiologia (IDPC). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 16/12899-6 - Caracterização genômica, epigenômica e farmacogenômica de portadores de Hipercolesterolemia Familial na população brasileira, AP.TEM
• Assunto(s): Biologia computacional Biologia molecular Sequenciamento de nova geração Sequenciamento completo do exoma Biblioteca gênica Análise de dados
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: bioinformática | Preparação de bibliotecas | sequenciamento | Biologia Molecular

Resumo

As novas tecnologias de sequenciamento, denominadas de tecnologias de sequenciamentos de alto rendimento ou de próxima geração (Next Generation Sequencing-NGS), sequenciam o DNA em plataformas capazes de gerar informação sobre milhões de pares de bases em uma única corrida, sendo uma alternativa poderosa para estudos de genômica estrutural e funcional. O ponto de partida comum é a preparação das amostras para o sequenciamento que consiste na fragmentação aleatória do DNA e a adição de adaptadores específicos de cada plataforma. A integridade do DNA que será utilizado é de fundamental importância para garantir que a fragmentação seja adequada, já que o tamanho dos fragmentos é um parâmetro chave para a construção da biblioteca. Objetivo: Elaborar bibliotecas de sequenciamento de alto rendimento, sequenciar exomas e a análise inicial dos resultados do sequenciamento. Metodologia: (i) Extrair e purificar DNA de amostras de sangue total de pacientes com Hipercolesterolemia; (ii) Avaliar a qualidade e quantidade de DNA por espectrofotometria e fluorimetria e eletroforese de alta definição; (iii) Preparo de biblioteca a partir de DNA dos pacientes; (iv) Análise primária dos dados de sequenciamento. Espera-se que esse projeto auxilie no desenvolvimento do projeto, cujo processo é laborioso e necessita de pessoas treinadas exclusivamente para tal finalidade, garantindo a reprodutibilidade e repetitividade dos processos, assim como o treinamento e aperfeiçoamento de alunos para capacitação na área de genômica que ainda carece de especialistas e incentivar a permanência na área de desenvolvimento tecnológico e acadêmica.