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Caracterização do papel regulatório da proteína transmembranar 1 contendo leucina e domínio EF (Letm1) na bioenergética celular de Trypanosoma cruzi

Processo: 18/04559-6
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
Vigência (Início): 01 de julho de 2018
Vigência (Término): 30 de junho de 2020
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
Pesquisador responsável:Aníbal Eugênio Vercesi
Beneficiário:Guilherme Rodrigo Reis Monteiro dos Santos
Instituição-sede: Faculdade de Ciências Médicas (FCM). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
Assunto(s):Trypanosoma cruzi   Proteínas de membrana transportadoras   Leucina   Cálcio   Metabolismo energético   Espécies de oxigênio reativas   Apoptose   Autofagia   CRISPR-Cas9   Inativação gênica

Resumo

O parasito Trypanosoma cruzi é o agente etiológico da Doença de Chagas. Os medicamentos existentes são ineficazes e de alta toxicidade. Estudos estruturais e funcionais de diversas proteínas estão em curso e são poderosas ferramentas para a identificação e desenvolvimento de novos alvos quimioterápicos. Um reconhecido alvo molecular no desenvolvimento de quimioterápicos são as proteínas reguladoras das funções mitocondriais. Os íons de cálcio atuam como importantes sinalizadores, tanto de processos vitais como de morte celular na matriz mitocondrial. Embora de extrema importância, os mecanismos regulatórios do transporte de cálcio no T. cruzi ainda são pouco conhecidos. Diversos estudos demonstram a importância dos transportadores moleculares uniporter de cálcio mitocondrial (MCU), dos transportadores responsáveis pela extrusão do Ca2+ da matriz mitocondrial, da proteína transmembranar 1 contendo leucina e domínio EF (Letm1). Embora estudos de gene knockout em células de Drosophila apontam para seu papel no transporte de Ca2+ da matriz mitocondrial por troca com H+, em Trypanosoma brucei a função de Letm1 parece estar associada trocador de íon K+/H+. Em T. cruzi, o papel da proteína Letm1 é ainda desconhecido. No presente projeto visamos estudar a regulação da bioenergética mitocondrial por Letm1 em T. cruzi, avaliando os níveis de Ca2+ mitocondriais, geração de espécies reativas de oxigênio e indução de morte do T. cruzi por apoptose ou autofagia pela diminuição dos níveis de ATP. Para tal estudo, utilizaremos intervenções moleculares no Letm1, como superexpressão, mutações sítio dirigidas usando o sistema CRISPR/Cas9 e silenciamento gênico pela expressão da riboenzima glmS. Além disso, realizaremos a expressão e purificação da proteína Letm1 para reconstrução do sistema transportador em lipossomos. (AU)

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