Caracterização do papel regulatório da proteína transmembranar 1 contendo leucina e domínio EF (Letm1) na bioenergética celular de Trypanosoma cruzi

• Processo: 18/04559-6
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de julho de 2018
• Data de Término da vigência: 31 de agosto de 2021
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Aníbal Eugênio Vercesi
• Beneficiário: Guilherme Rodrigo Reis Monteiro dos Santos
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Médicas (FCM). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
• Assunto(s): Trypanosoma cruzi Proteínas de membrana transportadoras Leucina Cálcio Metabolismo energético Espécies de oxigênio reativas Apoptose Autofagia CRISPR-Cas9 Inativação gênica
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: cálcio | Letm1 | Tryoanosoma cruzi | Biologia Molecular de Tripanosomatideos

Resumo

O parasito Trypanosoma cruzi é o agente etiológico da Doença de Chagas. Os medicamentos existentes são ineficazes e de alta toxicidade. Estudos estruturais e funcionais de diversas proteínas estão em curso e são poderosas ferramentas para a identificação e desenvolvimento de novos alvos quimioterápicos. Um reconhecido alvo molecular no desenvolvimento de quimioterápicos são as proteínas reguladoras das funções mitocondriais. Os íons de cálcio atuam como importantes sinalizadores, tanto de processos vitais como de morte celular na matriz mitocondrial. Embora de extrema importância, os mecanismos regulatórios do transporte de cálcio no T. cruzi ainda são pouco conhecidos. Diversos estudos demonstram a importância dos transportadores moleculares uniporter de cálcio mitocondrial (MCU), dos transportadores responsáveis pela extrusão do Ca2+ da matriz mitocondrial, da proteína transmembranar 1 contendo leucina e domínio EF (Letm1). Embora estudos de gene knockout em células de Drosophila apontam para seu papel no transporte de Ca2+ da matriz mitocondrial por troca com H+, em Trypanosoma brucei a função de Letm1 parece estar associada trocador de íon K+/H+. Em T. cruzi, o papel da proteína Letm1 é ainda desconhecido. No presente projeto visamos estudar a regulação da bioenergética mitocondrial por Letm1 em T. cruzi, avaliando os níveis de Ca2+ mitocondriais, geração de espécies reativas de oxigênio e indução de morte do T. cruzi por apoptose ou autofagia pela diminuição dos níveis de ATP. Para tal estudo, utilizaremos intervenções moleculares no Letm1, como superexpressão, mutações sítio dirigidas usando o sistema CRISPR/Cas9 e silenciamento gênico pela expressão da riboenzima glmS. Além disso, realizaremos a expressão e purificação da proteína Letm1 para reconstrução do sistema transportador em lipossomos. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

FIGUEIRA, TIAGO R.; FRANCISCO, ANNELISE; RONCHI, JULIANA A.; DOS SANTOS, GUILHERME R. R. M.; DOS SANTOS, WILLIAM; TREBERG, JASON R.; CASTILHO, ROGER F.. NADPH supply and the contribution of NAD(P)(+) transhydrogenase (NNT) to H2O2 balance in skeletal muscle mitochondria. Archives of Biochemistry and Biophysics, v. 707, AUG 15 2021. (11/51800-1, 20/05202-4, 18/04559-6, 17/17728-8)