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Avaliação de gotas lipídicas na maturação in vitro de oócitos bovinos obtidos de ovários com baixa e alta contagem de folículos antrais

Processo: 18/09006-5
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
Vigência (Início): 01 de outubro de 2018
Vigência (Término): 30 de junho de 2020
Área do conhecimento:Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
Pesquisador responsável:Sheila Merlo Garcia Firetti
Beneficiário:Leandro Francisco da Silva
Instituição-sede: Faculdade de Ciências Agrárias. Universidade do Oeste Paulista (UNOESTE). Campus de Presidente Prudente. Presidente Prudente , SP, Brasil
Assunto(s):Fertilização in vitro   Oócitos   Lipídeos   Bovinos   Maturação   Teste de Tukey   Técnicas in vitro

Resumo

Alguns estudos tem demonstrado relação positiva entre a contagem de folículos antrais (CFA) e parâmetros de fertilidade do rebanho bovino e apontam essa característica como uma importante e confiável ferramenta que poderia tornar mais eficiente a seleção de doadoras com alto potencial de produção de embriões in vitro (PIVE). Pode-se dizer que a maturação é uma das fases mais importantes da PIVE, já que é nesse momento que o oócito irá adquirir competência oocitária e capacidade para desenvolver-se até o estádio de blastocisto. No entanto, vários fatores que podem afetar a aquisição da competência oocitária e consequentemente o sucesso da maturação do oócito. Entre eles pode-se mencionar a quantidade de lipídeos presente nos oócitos. Os lipídeos são essenciais para as células, no entanto podem ser prejudiciais quando em excesso. O objetivo do presente projeto será avaliar a influência da contagem de folículos antrais ovarianos sobre a quantidade de gotas lipídicas em oócitos bovinos e sua capacidade para aquisição da competência para maturação in vitro, identificando o grupo que apresenta maior viabilidade para o procedimento de fertilização in vitro. Serão realizadas cinco repetições, utilizando-se ovários de fêmeas provenientes de abatedouro, sem raça definida. Em cada repetição os ovários serão separados em dois grupos: G1- alta CFA e G2- baixa CFA. A CFA visual deve incluir todos os folículos visíveis, e 3 milímetros de diâmetro e os limites numéricos serão definidos de acordo com a distribuição de dados mediante realização de ensaio estatístico. Após separação dos grupos os folículos visíveis serão aspirados e os oócitos selecionados e classificados de acordo com o aspecto morfológico dos CCO´s. Apenas oócitos grau I, II e III serão selecionados e avaliados separadamente antes e após a maturação in vitro (MIV). Os oócitos serão corados, com Sudan Black B 1% (199664, Sigma Co., St. Louis, EUA), e analisados individualmente em microscópio de luz (DMLS; Leica), para avaliação da quantidade de gotas de lipídeo em cada oócito. Os dados serão submetidos ao teste de normalidade Shapiro-Wilk. Verificada a distribuição normal dos dados o efeito da contagem de folículos antrais sobre a competência oocitária e qualidade de maturação será verificada por meio do teste de ANOVA seguida de teste de Tukey ao nível de significância de 5%. Caso contrário, será usado o teste não-paramétrico Qui-quadrado (Ç2) ao nível de significância de 5% e as comparações múltiplas pelo teste exato de Fisher. Todas as análises serão realizadas utilizando o programa computacional Statistical Analysis System for Windows (SAS Inst., Inc., Cary, NC).

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